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用過的sephadex G-25層析柱和DEAE纖維素離子交換柱再生的方法為什么不一樣

夏小笑8 2018-03-17 00:05:18 955  瀏覽
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  • 879757586 2018-03-17 21:10:51
    飛秒檢測發(fā)現(xiàn)sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯(lián)的凝膠柱,G-X, X:(1)交聯(lián)度。X越小,交聯(lián)度越大,網(wǎng)孔越小,適用于分離低分子量產(chǎn)品,反之亦然。(2)吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次后,必須反沖疏松一次,平衡后再使用。若使用數(shù)次,就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡,然后用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢,將再生后的凝膠在布氏漏斗上用蒸餾水洗滌抽干,再用95%乙醇洗兩次,在60℃烘箱中烘干,回收保存。 DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑?;|(zhì)是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中,基質(zhì)是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;而帶有負(fù)電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用于蛋白質(zhì)的分離純化。由于蛋白質(zhì)也有等電點,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì),所以這類蛋白質(zhì)被留在柱子上,然后通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質(zhì)洗脫下來。結(jié)合較弱的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì),結(jié)合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有強(qiáng)吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物質(zhì)則可用非離子型去污劑洗柱后再生,也可用乙醇洗滌,其順序為:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定(洗必泰),陽離子交換劑可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些產(chǎn)品建議用0.02%疊氮鈉。 兩種填料的抗酸堿性和抗腐蝕性能不同。

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