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- 一只小鳥5711 2017-01-25 00:00:00
- 1）測序文庫的構(gòu)建（Library Construction） 首先準(zhǔn)備基因組（雖然測序公司要求樣品量要達到200ng，但是Gnome Analyzer系統(tǒng)所需的樣品量可低至100ng，能應(yīng)用在很多樣品有限的實驗中），然后將DNA隨機片段化成幾百堿基或更短的小片段，并在兩頭加上特定的接頭（Adaptor）。如果是轉(zhuǎn)錄組測序，則文庫的構(gòu)建要相對麻煩些，RNA片段化之后需反轉(zhuǎn)成cDNA，然后加上接頭，或者先將RNA反轉(zhuǎn)成cDNA，然后再片段化并加上接頭。片段的大?。↖nsert size）對于后面的數(shù)據(jù)分析有影響，可根據(jù)需要來選擇。對于基因組測序來說，通常會選擇幾種不同的insert size，以便在組裝（Assembly）的時候獲得更多的信息。 2）錨定橋接（Surface Attachment and Bridge Amplification） Solexa測序的反應(yīng)在叫做flow cell的玻璃管中進行，flow cell又被細(xì)分成8個Lane，每個Lane的內(nèi)表面有無數(shù)的被固定的單鏈接頭。上述步驟得到的帶接頭的DNA 片段變性成單鏈后與測序通道上的接頭引物結(jié)合形成橋狀結(jié)構(gòu)，以供后續(xù)的預(yù)擴增使用。
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