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利用光學(xué)吸光度在kHz速率下對微流體液滴進(jìn)行聲學(xué)分選

泰初科技(天津)有限公司 2023-07-16 14:42:17 215  瀏覽
  • 采用HFE Novec 7500 (3m,美國)含1.8% FluoSurf表面活性劑(Emulseo,法國)的氟化油為連續(xù)相,水溶液為分散相形成液滴。表面活性劑用于穩(wěn)定液滴界面,防止液滴在重新注入芯片時破裂或合并。

    液滴微流控技術(shù)使人們能夠滿足日益增長的篩選大型生物樣本庫的需求。吸光度光譜通過無標(biāo)簽?zāi)繕?biāo)識別補(bǔ)充了熒光檢測的黃金標(biāo)準(zhǔn),并提供了更多的可量化數(shù)據(jù)。然而,這受到速度和靈敏度的限制。在本文中,我們通過加入聲流體來提高分選速度,實(shí)現(xiàn)了1 kHz的目標(biāo)液滴分選率。我們改進(jìn)了微流控PDMS光聚焦準(zhǔn)直裝置的吸光度檢測裝置設(shè)計(jì),利用集成透鏡對樣品進(jìn)行基于纖維的問詢。這種光學(xué)改進(jìn)減少了散射和折射偽影,提高了信號質(zhì)量和靈敏度。這種新穎的設(shè)計(jì)使我們能夠克服基于介電分選的限制,例如液滴大小依賴性,樣品的材料和介電性質(zhì)。我們的聲波激活吸收分選機(jī)消除了對偏移染料或匹配油的需求,并且比當(dāng)前的吸收分選機(jī)更快地進(jìn)行分類。



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熱門問答

利用光學(xué)吸光度在kHz速率下對微流體液滴進(jìn)行聲學(xué)分選

采用HFE Novec 7500 (3m,美國)含1.8% FluoSurf表面活性劑(Emulseo,法國)的氟化油為連續(xù)相,水溶液為分散相形成液滴。表面活性劑用于穩(wěn)定液滴界面,防止液滴在重新注入芯片時破裂或合并。

液滴微流控技術(shù)使人們能夠滿足日益增長的篩選大型生物樣本庫的需求。吸光度光譜通過無標(biāo)簽?zāi)繕?biāo)識別補(bǔ)充了熒光檢測的黃金標(biāo)準(zhǔn),并提供了更多的可量化數(shù)據(jù)。然而,這受到速度和靈敏度的限制。在本文中,我們通過加入聲流體來提高分選速度,實(shí)現(xiàn)了1 kHz的目標(biāo)液滴分選率。我們改進(jìn)了微流控PDMS光聚焦準(zhǔn)直裝置的吸光度檢測裝置設(shè)計(jì),利用集成透鏡對樣品進(jìn)行基于纖維的問詢。這種光學(xué)改進(jìn)減少了散射和折射偽影,提高了信號質(zhì)量和靈敏度。這種新穎的設(shè)計(jì)使我們能夠克服基于介電分選的限制,例如液滴大小依賴性,樣品的材料和介電性質(zhì)。我們的聲波激活吸收分選機(jī)消除了對偏移染料或匹配油的需求,并且比當(dāng)前的吸收分選機(jī)更快地進(jìn)行分類。



2023-07-16 14:42:17 215 0
簡單的微流體液滴小球?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)平臺

一個簡單的常規(guī)的微流體液滴小球產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)由多通道壓力流量控制器OB1 MK3+,倒置光學(xué)顯微鏡和高速相機(jī),微流體質(zhì)量流量計(jì)BFS1+和微流體流量傳感器MFS2、PDMS液滴芯片套裝及Emulseo FluoSurf HFE7500連續(xù)油相等組成。

只需要簡單的三步(連接裝置,推入液體,調(diào)節(jié)流速),便可產(chǎn)生所需要的液滴小球。

如果動手能力強(qiáng)的話,可以自行在實(shí)驗(yàn)室搭建顯微成像平臺(利用無限遠(yuǎn)平場物鏡、放大倍數(shù)的鏡筒和相機(jī)等的組合),也可以搭建液滴產(chǎn)生系統(tǒng)。

FluoSurf HFE7500或FC40氟化油具有生物相容性,兼容PDMS芯片,可以延長PDMS芯片的使用壽命。我司備有大量的emulseo FluoSurf表面活性劑,隨時滿足您的應(yīng)用需要如單細(xì)胞分析、數(shù)字PCR、液滴小球包裹、細(xì)胞培養(yǎng)、化學(xué)反應(yīng)過程控制、水凝膠合成、氫膠合成等。

下圖是FluoSurf表面活性劑和微流體液滴實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)平臺的實(shí)物照片。


2022-04-21 20:42:28 268 0
微流控單細(xì)胞計(jì)數(shù)/分選

電阻抗檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)、生命科學(xué)、食品安全、疾病診斷等領(lǐng)域。在微流控領(lǐng)域,電阻抗檢測技術(shù)可應(yīng)用于單細(xì)胞或微液滴的檢測與分析、生物組織分析、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞分選、交流介電電泳(DEP)和生物阻抗測量等。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的微流控電阻抗檢測系統(tǒng)在一定程度上可以看成是由多個不同功能的模塊經(jīng)過有效的有機(jī)組合而成的。該檢測系統(tǒng)主要包括五個模塊:微流控電阻抗檢測芯片、微流控芯片進(jìn)樣泵、流量計(jì)或壓力計(jì)、電阻抗分析儀/鎖相放大器、光學(xué)顯微鏡等,如下圖所示。



對于以上四個模塊的組合,我們僅僅給出一個微流控電阻抗檢測系統(tǒng)的連接示例,如下圖1所示。對于該系統(tǒng)中所用到的設(shè)備,可以使用其他的實(shí)驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行代替,但是總體的連接方式是相同的。MFCS或者OB1Mk3驅(qū)動泵把儲液池內(nèi)的液體推入到微流控芯片的通道內(nèi)。MFLI或者HF2LI產(chǎn)生一個或多個不同頻率的正弦電壓信號,施加在電阻抗芯片的激勵電極上,敏感電極測量到的電流信號經(jīng)過跨阻放大器轉(zhuǎn)化為電壓信號并對信號進(jìn)行放大。放大后的電壓信號輸送到MFLI或者HF2LI鎖相放大器。MFLI或者HF2LI鎖相放大器MFCS或者OB1mk3驅(qū)動泵的參數(shù)調(diào)節(jié)和控制都在PC電腦上的LabOne軟件和MAESFLO軟件或者Elveflow Smart Interface上進(jìn)行設(shè)置。


圖1 微流控動態(tài)電阻抗檢測系統(tǒng)連接圖



HF2儀器與電阻抗芯片連接的實(shí)物圖


如下以瑞士蘇黎世儀器的MFLI鎖相放大器連接電阻抗芯片為例介紹微流控動態(tài)電阻抗檢測的原理。



MFLI鎖相放大器與電阻抗芯片的連接圖


動態(tài)電阻抗檢測可用于測量微流體芯片通道內(nèi)單個粒子的介電特性。以兩對共面電極的微流控電阻抗芯片為例介紹動態(tài)電阻抗檢測的過程,芯片結(jié)構(gòu)示意圖[8]如上圖所示。在微流體芯片通道內(nèi)加工兩對金屬微電極,一對微電極作為測量電極,用于測量介質(zhì)溶液中單個粒子經(jīng)過時的電流變化,而另一對電極作為參考電極,僅用于測量介質(zhì)溶液的電流。當(dāng)MFLI鎖相放大器對兩對電極同時施加一定幅值且具有一個頻率或多個不同頻率的交流信號時,微流體芯片通道內(nèi)兩對電極之間會產(chǎn)生電場。當(dāng)粒子經(jīng)過電極對之間的間隙時,電場會受到擾動而產(chǎn)生電流的變化,電流變化的幅度取決于粒子的尺寸、形狀和介電性質(zhì)。變化的電流經(jīng)跨阻差分放大器進(jìn)行放大并轉(zhuǎn)換為差分電壓信號。MFLI鎖相放大器同時解調(diào)一個頻率或多個不同頻率的差分電壓信號,從而給出每一個頻率信號的同相分量和正交分量或者幅值和相位值,同時抵制所有其他頻率信號的干擾。所測量的電阻抗的變化可在本地電腦上的LabOne軟件里的Plotter進(jìn)行實(shí)時觀察且測量的數(shù)據(jù)可直接保存在本地電腦,方便后續(xù)使用MATLAB、Python等軟件進(jìn)行分析處理。


LabOne軟件顯示動態(tài)差分測量的顯示曲線



帶有共面金屬電極的PDMS芯片中產(chǎn)生油包水微液滴,石蠟油為連續(xù)相(含span80表面活性劑),經(jīng)過濾后的去離子水為分散相。產(chǎn)生的微液滴如下視頻所示。


MFLI鎖相放大器動態(tài)差分輸入檢測PDMS芯片中產(chǎn)生的微液滴視頻如下所示。


 


2019-08-19 17:24:22 1100 0
聲學(xué)知識,什么是±4 dB at 100 kHz ?
如圖所示,參數(shù)里有水平擇向性,是什么意思?后面的參數(shù)又是什么意思?... 如圖所示,參數(shù)里有水平擇向性,是什么意思?后面的參數(shù)又是什么意思? 展開
2017-08-21 01:29:44 372 1
基于海洋光學(xué)HR2進(jìn)行牛血清白蛋白的吸光度測量

吸光度是用來衡量光被物質(zhì)吸收程度的一個物理量。利用光譜技術(shù)測量吸光度簡便高效,因此被廣泛應(yīng)用于液體和氣體的吸光度測量,用于科研分析,還可集成至工業(yè)測試系統(tǒng)中。


為了評估新產(chǎn)品Ocean HR2吸光度測量性能,我們在蒸餾水中測量了近30種不同濃度的503mg牛血清白蛋白(BSA通常用作生化應(yīng)用中的蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品)樣品。


實(shí)驗(yàn)配置

本次實(shí)驗(yàn)的配置包括海洋光學(xué)Ocean HR2高分辨率光譜儀(190-880 nm)、一個帶衰減器的氘鎢鹵素光源、一對400μm光纖和一個帶比色皿支架的石英比色皿以及OceanView操作軟件、 OceanDirect二次開發(fā)包。



數(shù)據(jù)及分析

為了確保最 佳的測量結(jié)果,我們首先將光譜儀和光源預(yù)熱30分鐘,使光源處于熱平衡狀態(tài)。此外,為了防止出現(xiàn)誤差,我們無需將比色皿從比色皿支架上取下,而是在比色皿中直接進(jìn)行稀釋,使用一次性移液管加入部分樣品,然后再加入去離子水混合,并針對每個樣品重復(fù)該操作過程。


圖1. 牛血清白蛋白樣品在280nm處吸收峰


我們的測量集中在280nm處的BSA吸光度峰(圖1),其吸光度線性為0.999,極限值高達(dá)2.5 AU(圖2)。這種性能水平將有利于量化大多數(shù)類型的蛋白質(zhì)濃度,所以非常適用于生物方面的應(yīng)用,包括藥物配方的質(zhì)量監(jiān)測。


圖2. 在近30個BSA樣品上測得的吸光度線性度高達(dá)0.999


高速平均模式提高信噪比

高速平均模式(HSAM)是通過OceanDirect二次開發(fā)包實(shí)現(xiàn)的一種基于硬件加強(qiáng)信號的功能,可提高海洋光學(xué)光譜儀的信噪比性能。信噪比越高,光譜質(zhì)量越好,結(jié)果越準(zhǔn)確。


高速平均模式可以在給定時間段內(nèi)進(jìn)行更多次的平均,從而提供更高的信噪比,OceanDirect設(shè)備驅(qū)動程序可以在200毫秒內(nèi)處理10,000個平均值,速度提高了10倍。這對于時間要求高的應(yīng)用和實(shí)時應(yīng)用非常重要,在這些應(yīng)用中,必須非??焖佟?zhǔn)確地做出判斷。


總結(jié)

高分辨率(<1.0 nm FWHM)

高速采集(1 μs 積分時間)

高信噪比(380: 1)


Ocean HR2 集“三高”于一身的特性,使其成為蛋白質(zhì)樣品濃度測量、分子診斷、制藥材料污染物鑒定等多種應(yīng)用的理想選擇。


Ocean HR2 在實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)線上的表現(xiàn)都相當(dāng)出色,為客戶提供科研級光譜儀的性能。既能作為獨(dú)立設(shè)備使用,也可以作為集成設(shè)備中的關(guān)鍵子系統(tǒng)或組件。



2022-12-08 10:33:34 278 0
dj6型光學(xué)經(jīng)緯儀如何利用分微尺進(jìn)行讀數(shù)?
 
2017-08-22 19:09:25 844 1
利用紫外-可見分光光度計(jì)在210nm處測定吸光度,讀數(shù)不穩(wěn)定
測硝態(tài)氮的時候,發(fā)現(xiàn)無論放任何樣品還是標(biāo)準(zhǔn)液,甚至是超純水,210nm處的吸光度和透光率不穩(wěn)定,波動較大,請問是什么原因?換了兩臺不同的儀器都是如此... 測硝態(tài)氮的時候,發(fā)現(xiàn)無論放任何樣品還是標(biāo)準(zhǔn)液,甚至是超純水,210nm處的吸光度和透光率不穩(wěn)定,波動較大,請問是什么原因?換了兩臺不同的儀器都是如此 展開
2018-03-22 15:50:15 734 1
狹縫寬度為什么對吸光度有影響
 
2018-12-06 12:57:55 387 0
微流控液滴包覆應(yīng)用之液滴測序(Droplet-Sequenc

細(xì)胞是生物結(jié)構(gòu)和功能的基本單元,在類型和狀態(tài)上有很大差異。在大多數(shù)生物系統(tǒng)中,我們對細(xì)胞多樣性的認(rèn)識是不完整的,就像神經(jīng)系統(tǒng)(腦細(xì)胞)這樣的復(fù)雜組織[1]。單細(xì)胞識別和功能的表征,作為對每個細(xì)胞的功能和反應(yīng)的理解,將加速生物領(lǐng)域的發(fā)現(xiàn)。它可能是癌癥、腫瘤,幾何任何可能在細(xì)胞群中具有多樣性的東西。然而,今天的技術(shù)并不能提供一種簡單的方法來同時分析大量的單個細(xì)胞??焖?、可擴(kuò)展的液滴測序(Drop-Seq)這種方法可以用來表征具有許多細(xì)胞類型和狀態(tài)的復(fù)雜組織。



Drop-Seq的原理和好處
Drop-Seq是一種基于使用微流體技術(shù)的方法,通過將它們封裝在微小液滴中進(jìn)行平行分析,可以快速分析數(shù)千個單個細(xì)胞。

這些納升級水性隔離室已用于微流體器件中的許多應(yīng)用:納米顆粒制造、乳液和泡沫、藥物輸送,但也作為PCR和逆轉(zhuǎn)錄的微小反應(yīng)室[3]。Drop-Seq使用液滴將細(xì)胞分隔成納升大小的反應(yīng)室,用于分析其mRNA轉(zhuǎn)錄物,同時使用分子條形碼策略記住轉(zhuǎn)錄物的起源細(xì)胞。通過這種技術(shù),一個科學(xué)家每天可以制作10000個單細(xì)胞庫,實(shí)驗(yàn)并行進(jìn)行且簡單。因此,該方法將允許為已知細(xì)胞類別和新的候選細(xì)胞亞型產(chǎn)生基因表達(dá)的分子圖譜。

Drop-Seq利用微流體的優(yōu)勢

(1)很短的時間內(nèi)有很高的吞吐量

(2)盡量減少昂貴樣品的消耗


Drop-Seq包含以下步驟

1. 從組織中制備單細(xì)胞懸浮液
2. 準(zhǔn)備條形碼引物(或者在微顆粒表面或者在內(nèi)部)
3. 使用微流體裝置將每個細(xì)胞單獨(dú)地與一個微小條紋的微粒共同包覆或封裝在一個微小的液滴中
4. 一旦分離成液滴,裂解細(xì)胞,釋放它們的mRNA,然后與引物(primers)雜交。
5. 打破液滴并產(chǎn)生STAMP(附著于微粒的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組)
6. 放大STAMP
7. 測試和分析:使用STAMP條形碼推斷每個轉(zhuǎn)錄物的起源細(xì)胞


Drop-Seq可以使用2種beads:
A:“簡單”的微粒
B:水凝膠微粒





該項(xiàng)工作的ZD是“簡單”微粒的使用,并簡要介紹了水凝膠微粒,其原理保持不變。


Drop-Seq使用簡單的微粒
1. 從復(fù)雜的組織中準(zhǔn)備單細(xì)胞懸浮液
將復(fù)雜組織解離成單個細(xì)胞




2. 引物(primer)合成
微粒上的引物序列
每個微粒包含超過108個單獨(dú)的引物,它們共享相同的“PCR句柄(PCR handle)”和“細(xì)胞條形碼(cell barcode)”,但具有不同的獨(dú)特分子標(biāo)識符(UMI)。事實(shí)上,PCR句柄在所有引物和beads上具有相同的恒定的序列,這允許在STAMP形成后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。細(xì)胞條形碼,僅在相同微粒的所有引物上相同但與其他beads上的細(xì)胞條形碼不同,允許回復(fù)細(xì)胞的起源。每種引物上不同的UMI允許對mRNA轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行數(shù)字計(jì)數(shù)并鑒定PCR duplicates。Z后,在所有引物序列的末端存在30bp的oligodT序列,用于捕獲mRNA并引發(fā)逆轉(zhuǎn)錄。




細(xì)胞條形碼的分裂和池合成(split-and-pool synthesis)
為了產(chǎn)生細(xì)胞條形碼,將微粒庫重復(fù)分成四個大小相等的寡核苷酸合成反應(yīng),向其中加入四個DNA堿基中的一個。然后,在每個循環(huán)后將微粒合并在一起,并進(jìn)行總共12次分裂-池循環(huán)(split-pool cycles)。結(jié)果是一個微粒庫,每個微粒具有4^12(16,777,216)個可能的DNA堿基序列之一。[4]




合成獨(dú)特的分子標(biāo)識符(UMI)
UMI的合成在“分裂-池(split-and-pool)”合成循環(huán)完成后進(jìn)行。將所有微粒一起進(jìn)行八輪簡并合成,每個循環(huán)期間可獲得所有四種DNA堿基,使得每個單獨(dú)的引物接受4^8(65,536)種可能序列(UMI)中的一種。[5]




3. 微流體裝置
一旦單細(xì)胞懸浮液和微粒準(zhǔn)備就緒,使用定制設(shè)計(jì)的微流體裝置將單個細(xì)胞與微粒一起包覆在液滴中。





Image courtesy of Patrick Stumpf, Matthew Rose-Zerilli, Rosanna Smith, Martin Fischlechner & Jonathan West at the Centre for Hybrid Biodevices & Cancer Sciences Unit at the University of Southampton


該裝置在它們分成離散的液滴之前連接兩路水相。層流防止在液滴形成之前混合兩種水相輸入,一路流相包含細(xì)胞,另一路流相包含懸浮在裂解緩沖液中的條形碼引物beads。





微流體裝置
組件列表
(1)倒置顯微鏡
(2)壓力控制器+3流量傳感器/三個注射泵
(3)3個falcon管/3mL注射器
(4)磁力攪拌系統(tǒng)
(5)用于實(shí)驗(yàn)裝置元件連接的微流體導(dǎo)管
(6)微流體配件和連接器
(7)PDMS共流微流體液滴生成裝置
(8)用于beads的100微米細(xì)胞過濾器
(9)用于細(xì)胞的40微米細(xì)胞過濾器
(10)計(jì)數(shù)室

實(shí)驗(yàn)裝置連接示意圖



4. 細(xì)胞裂解和RNA雜交
在液滴形成后,立即將每個細(xì)胞在液滴內(nèi)裂解并釋放其mRNA。然后,它們與其伴隨的微粒表面上的引物雜交。




5. STAMPS產(chǎn)生
為了一次有效地產(chǎn)生數(shù)千個STAMP,通過添加試劑來破壞液滴以使油-水界面不穩(wěn)定,并收集和洗滌微粒。然后將mRNA在一個反應(yīng)中一起逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,形成一組稱為“附著于微粒的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組(STAMPs)”的beads[6]。




6. STAMPS的放大
然后可以通過PCR反應(yīng)在池(pools)中擴(kuò)增條形碼化的STAMP,用于高通量mRNA測序,以分析任何所需數(shù)量的單個細(xì)胞。




7. 測序和分析
使用高容量平行測序?qū)γ總€末端對得到的分子進(jìn)行測序。首先,將讀數(shù)與參考基因組比對以鑒定cDNA的起源基因。接下來,通過細(xì)胞條形碼組織讀數(shù),并且對每個細(xì)胞中確定的每個基因的mRNA轉(zhuǎn)錄物的數(shù)量進(jìn)行數(shù)字計(jì)數(shù)。這是UMI發(fā)揮作用的地方,避免從同一mRNA轉(zhuǎn)錄物中重復(fù)計(jì)數(shù)序列讀數(shù)。隨后,可以建立數(shù)字基因表達(dá)測量矩陣(每個細(xì)胞每個基因一個測量)用于進(jìn)一步的分析。






使用水凝膠微球的Drop-Seq測序
關(guān)于水凝膠beads的使用,操作原理或多或少與以上保持相同,即Z大的區(qū)別在于引物(primers),它們位于微粒內(nèi)而不是位于它們的表面上。




為此,微流體裝置由三個通道而不是兩個通道組成:
(1)帶beads的一個通道(Z關(guān)鍵的部分)
(2)把細(xì)胞帶入液滴的一個通道
(3)帶來我們需要進(jìn)行分析的化學(xué)試劑的一個通道



至于“簡單微粒(simple microparticles)”的使用,水凝膠beads含有可用于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的引物,然后隨后對液滴內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)容物進(jìn)行條形碼編碼,由此獲得作為RNA序列的拷貝的DNA序列的集合,并且現(xiàn)在通過它們來自哪一個液滴來對這些序列進(jìn)行分類。

然后,可以打破液滴并將整個細(xì)胞群作為大量樣品處理,知道每個細(xì)胞已被單獨(dú)編碼。

相關(guān)的資源
開源鏈接:McCarroll Lab

液滴測序:Droplet-Sequencing


參考論文
[1] L. Luo et al., Genetic Dissection of Neural Circuits.
[2] B. J. Hindson et al., High-Throughput Droplet Digital PCR System for Absolute Quantitation of DNA Copy Number.
[3] N. R. Beer et al., On-Chip Single-Copy Real-Time Reverse-Transcription PCR in Isolated Picoliter Droplets.
[4-6] Macosko et al., Highly Parallel Genome-Wide Expression Profiling of Individual Cells Using Nanoliter Droplets.

2019-08-19 17:23:13 741 0
液滴研討會/網(wǎng)絡(luò)課程:液滴微流控的動態(tài)分析

微流控液滴技術(shù)是近年來在微流控芯片上發(fā)展起來的一種研究幾微米至幾百微米尺度范圍內(nèi)微液滴的生成、操控及應(yīng)用的新技術(shù)。微液滴常作為微反應(yīng)器,實(shí)現(xiàn)生化反應(yīng)、試劑快速混合以及微顆粒合成等,極大地強(qiáng)化了微流控芯片的低消耗、自動化和高通量等優(yōu)點(diǎn)。本次網(wǎng)絡(luò)課堂主要介紹了微流控液滴的動態(tài)分析部分如速度場、表面活性劑等知識。



2020-07-08 14:49:21 448 0
用滴管吸一滴什么滴在載玻片的一側(cè)進(jìn)行染色
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2015-10-04 10:23:37 568 1
【微光譜應(yīng)用】Ocean HR2吸光度及分辨率測評

Ocean HR2光纖光譜儀憑借其專有的CCD陣列探測器和低雜散光光學(xué)平臺設(shè)計(jì),為從等離子體監(jiān)測到藥物分析等各種應(yīng)用提供了優(yōu)異的光譜性能。本次測試,將聚焦海洋光學(xué)HR2光纖光譜儀的吸光度線性度以及高分辨率性能。

 

關(guān)于Ocean HR2

 

海洋光學(xué)Ocean HR2高分辨率光纖光譜儀結(jié)構(gòu)緊湊,堅(jiān)固耐用,積分時間快至1μs,熱波長穩(wěn)定性——漂移小于每攝氏度0.06個像素,可在溫度變化時保證可靠的光譜性能。它涵蓋 ~190-1150 nm 內(nèi)各種波長范圍,可選狹縫尺寸,以幫助用戶控制光通量和光學(xué)分辨率。


Ocean HR2光譜儀可與海洋光學(xué)光源、附件和軟件兼容,允許用戶針對不同的應(yīng)用優(yōu)化。此外,每臺HR2海洋光學(xué)光譜儀都配有Ocean Direct,這是個功能強(qiáng)大的跨平臺軟件開發(fā)工具包,帶有應(yīng)用程序編程接口。


吸光度測量:重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品


為測試海洋光學(xué)HR2光纖光譜儀的吸光度線性度,測量了重鉻酸鉀吸光度標(biāo)準(zhǔn)品,每種樣品的濃度水平都不同。


測量吸光度實(shí)驗(yàn)包括海洋光學(xué)HR2-UV-VIS光譜儀、帶衰減器的DH-2000氘燈光源、兩根400 μm光纖,石英比色皿、Square One比色皿支架和海洋光譜儀軟件OceanView。

圖1.重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品的紫外吸光度

(濃度范圍20.27-100.95 mg/L)


圖1為使用Ocean HR2測得的紫外吸收譜,可看出Ocean HR2出色的低雜散光性能,特別是當(dāng)繪制與濃度關(guān)系時,其吸光度線性度為0.9997(圖2)。

圖2.高吸光度線性度是海洋光學(xué)光譜儀HR2的一個特點(diǎn)。


藍(lán)色線為重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品的測量結(jié)果,基于該標(biāo)準(zhǔn)曲線,可預(yù)測該波長范圍內(nèi)1.5 AU以下幾乎任何樣品的濃度。


吸光度測量:牛血清白蛋白BSA


BSA常用作生化應(yīng)用中的蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品。下面使用與重鉻酸鉀實(shí)驗(yàn)相同的Ocean HR2光譜儀配置,在蒸餾水中測量了質(zhì)量同為503mg的30種不同濃度的BSA。


為確保獲得更佳測量結(jié)果,建議在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下:


測量前,將光譜儀和光源預(yù)熱30分鐘。預(yù)熱有助于光源達(dá)到熱平衡狀態(tài),避免由于光源輸出的微小變化而導(dǎo)致的測量偏差。


采樣時避免取下石英比色皿,因?yàn)檫@樣做可能會引入錯誤。正確的做法是,在比色皿中進(jìn)行溶液稀釋,使用一次性移液管吸取每個樣品的一部分,然后在去離子水中混合,并對每個樣品重復(fù)該過程。


同時,還建議避免測量中移動光纖。

圖3. BSA樣品在 279 nm 處有強(qiáng)烈的吸收峰。


使用BSA測量的吸光度線性度結(jié)果甚至比重鉻酸鉀更好。取279 nm處的吸收峰(圖3),吸光度直至2.5AU,也能保證吸光度線線性度0.999(圖4)。這種性能使Ocean HR2成為定量其他類型的蛋白質(zhì)濃度及生物應(yīng)用,如分析血液成分和對藥物配方進(jìn)行質(zhì)量保證的理想選擇。

圖4. 近30個BSA樣品上測得的吸光度線性度高達(dá)0.999。


高分辨率的Ocean HR2:識別譜線


由于光學(xué)平臺優(yōu)化設(shè)計(jì),HR2海洋光學(xué)光譜儀的分辨率(FWHM)通常小于1nm。例如在測量汞氬燈氣體放射光源時,在UV-VIS波段觀察到很多明確的尖峰(圖5)。

圖5.根據(jù)配置,可使用海洋光學(xué)光譜儀Ocean HR2實(shí)現(xiàn)亞納米級光學(xué)分辨率。


在測太陽輻照度時觀察到類似的光學(xué)分辨率性能,25μm狹縫的Ocean HR2在其光譜范圍內(nèi)檢測到光學(xué)分辨率小于1.2nm的光譜發(fā)射線(圖6)。


采樣配置包括一個連接到600μm VIS-NIR光纖的余弦校正器,該光纖被放置在反射探頭支架中,并以90°對著天空。

圖6. HR2海洋光學(xué)光譜儀在太陽輻照度測量中展示了其多功能性。


結(jié)語


從檢測等離子體和氣體中的窄發(fā)射線到確定蛋白質(zhì)的濃度,Ocean HR2 光纖光譜儀在實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)線上提供科研級光譜儀性能,能夠勝任研究或系統(tǒng)集成的苛刻要求。


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