全部評(píng)論(1條)
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- 荷葉下的魚的家 2016-04-09 00:00:00
- 血細(xì)胞計(jì)數(shù)的誤差分別來(lái)源于技術(shù)誤差和固有誤差.其中由于操作人員采血不順利，器材處理、使用不當(dāng)，稀釋不準(zhǔn)確，細(xì)胞識(shí)別錯(cuò)誤等因素所造成的誤差屬技術(shù)誤差；而由于儀器（計(jì)數(shù)板、蓋片、吸管等）不夠準(zhǔn)確與精密帶來(lái)的誤差稱儀器誤差，由于細(xì)胞分布不均勻等因素帶來(lái)的細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差屬于分布誤差或計(jì)數(shù)域誤差（filed error）.儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差.技術(shù)誤差和儀器誤差可通過(guò)規(guī)范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正，但細(xì)胞分布誤差卻難于徹底消除.因此，搞好細(xì)胞計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制一般需采用以下措施. 1．避免技術(shù)誤差，糾正儀器誤差 （1）所用器材均應(yīng)清潔干燥，計(jì)數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求或經(jīng)過(guò)校正.①計(jì)數(shù)板的鑒定：要求計(jì)數(shù)室的臺(tái)面光滑、透明，劃線清晰，計(jì)數(shù)室劃線面積準(zhǔn)確.必要時(shí)采用嚴(yán)格校正的目鏡測(cè)微計(jì)測(cè)量計(jì)數(shù)室的邊長(zhǎng)與底面積，用微米千分尺測(cè)量計(jì)數(shù)室的深度.美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定每個(gè)大方格邊長(zhǎng)的誤差應(yīng)小于1%，即1±0.01mm，深度誤差應(yīng)小于2%，即0.1±0.002mm.若超過(guò)上述標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)棄之不用.②血蓋片應(yīng)具有一定的重量，平整、光滑、無(wú)裂痕，厚薄均勻一致，可使用卡尺多點(diǎn)測(cè)量（至少在9個(gè)點(diǎn)），不均勻度在0.002mm之內(nèi).必要時(shí)采用平面平行儀進(jìn)行測(cè)量與評(píng)價(jià)，要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋.Z簡(jiǎn)單的評(píng)價(jià)方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的時(shí)間不脫落，落下時(shí)呈弧線形旋轉(zhuǎn)，表示蓋片平整、厚薄均勻.同時(shí)，合格的蓋片放置在計(jì)數(shù)室表面后，與支持柱緊密接觸的部位可見(jiàn)到彩虹.精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后，在掠射光線下觀察，如見(jiàn)到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求.③目前臨床實(shí)驗(yàn)室多采用一次性微量采血管采集毛細(xì)血管血，除注意定點(diǎn)購(gòu)買使用信譽(yù)較好廠家的產(chǎn)品外，還應(yīng)對(duì)每一批量的采血管進(jìn)行抽樣檢查，可通過(guò)水銀稱重法或有色溶液比色法進(jìn)行校正，誤差不應(yīng)超過(guò)±1%. （2）細(xì)胞稀釋液應(yīng)新鮮、無(wú)雜質(zhì)微粒. （3）嚴(yán)格操作，從消毒、采血、稀釋、充池到計(jì)數(shù)都應(yīng)規(guī)范，尤其應(yīng)注意的是血樣稀釋及充池時(shí)既要作到充分混勻，又要防止劇烈震蕩為破壞紅細(xì)胞.必須一次性充滿計(jì)數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細(xì)胞懸液的量以不超過(guò)計(jì)數(shù)室臺(tái)面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜. （4）報(bào)告法定計(jì)量單位. 2．縮小計(jì)數(shù)域誤差或分布誤差 由于血細(xì)胞在充入計(jì)數(shù)室后呈隨機(jī)分布或稱Poisson分布（ ），而我們所能計(jì)數(shù)的細(xì)胞分布范圍是有限的，由此造成的計(jì)數(shù)誤差稱為計(jì)數(shù)域誤差或分布誤差.縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴(kuò)大細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍和計(jì)數(shù)數(shù)目，一般先進(jìn)行誤差估計(jì)，然后決定所需計(jì)數(shù)的數(shù)目和計(jì)數(shù)范圍，只要能將誤差控制在允許范圍內(nèi)即可.Berkson指出，當(dāng)使用同一支吸管、同一面計(jì)數(shù)室，計(jì)數(shù)0.2mm2面積的細(xì)胞數(shù)，有望將 CV控制在可接受的7%以內(nèi).對(duì)于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)而言，由于紅細(xì)胞數(shù)量較多，在計(jì)數(shù)室中顯得比較“擁擠”，根據(jù)Poisson公式（ ）推斷，.欲將誤差控制在變異百分?jǐn)?shù)5%以內(nèi)，至少需要在計(jì)數(shù)室中計(jì)數(shù)400個(gè)紅細(xì)胞，因此要求計(jì)數(shù)五個(gè)中方格的紅細(xì)胞.事實(shí)上Berkson還通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)域誤差為s=0.92 ，較理論誤差（Poisson分布誤差）要小. 3．排除異常標(biāo)本的干擾 白細(xì)胞數(shù)量在正常范圍時(shí)，相對(duì)于紅細(xì)胞數(shù)量來(lái)講，其影響可忽略，但如白細(xì)胞過(guò)高（>100×109/L），則應(yīng)對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行校正.方法是：①實(shí)際RBC=計(jì)得RBC-WBC.如當(dāng)紅細(xì)胞換算后為3.5×1012/L、白細(xì)胞換算后為100×109/L時(shí)，病人實(shí)際紅細(xì)胞數(shù)應(yīng)為3.4×1012/L.②在高倍鏡下計(jì)數(shù)時(shí)，避開有核細(xì)胞.有核細(xì)胞體積比正常紅細(xì)胞大，ZY無(wú)凹陷，無(wú)草黃色折光，可隱約見(jiàn)到細(xì)胞核.此外，當(dāng)病人急性嚴(yán)重貧血時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞可提前大量釋放，也給紅細(xì)胞計(jì)數(shù)帶來(lái)一定的干擾，而且影響網(wǎng)織紅細(xì)胞值計(jì)算結(jié)果.其校正方法有待探討
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熱門問(wèn)答
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01
如何提高細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析的準(zhǔn)確性？
姚金龍
貝克曼庫(kù)爾特高級(jí)應(yīng)用專員
講座簡(jiǎn)介：
在各種細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析方法中，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)疑是細(xì)胞活率分析的金標(biāo)準(zhǔn)。
目前，通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色分析細(xì)胞活率的方法包括：傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板法，也有市場(chǎng)上很普遍的插片式半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，以及無(wú)需手動(dòng)混勻和染色的全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀。其中，后兩個(gè)分析儀器的出現(xiàn)，不僅很大程度地解放了人力，同時(shí)相比于顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板法會(huì)更省時(shí)，更合規(guī)，所以被各大制藥企業(yè)所使用。而全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀更是在工藝開發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控方面表現(xiàn)出特有的優(yōu)勢(shì)，即減少了人為的樣品吹打混勻和臺(tái)盼藍(lán)染色操作誤差，而且每種細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化的測(cè)試條件，提高了儀器間數(shù)據(jù)的一致性而廣受歡迎。
但是大家在使用這些儀器一段時(shí)間后，可能會(huì)遇到這樣一些問(wèn)題，譬如：自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的測(cè)試結(jié)果為何有時(shí)和血球計(jì)數(shù)板的結(jié)果對(duì)不上，我該相信哪一個(gè)？細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)試標(biāo)樣沒(méi)有問(wèn)題，但一檢測(cè)細(xì)胞怎么就不行了呢？為何同樣都是CHO細(xì)胞，同事測(cè)試結(jié)果是符合預(yù)期的，我的為何就不行呢？
以上問(wèn)題其實(shí)歸結(jié)一下都是我們測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性的問(wèn)題，如何減小測(cè)試方法的人為誤差？如何提高我們使用的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀的測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性？這些問(wèn)題都將在此次講座中和大家一起來(lái)探討交流。02
高產(chǎn)穩(wěn)定CHO細(xì)胞株構(gòu)建策略
劉玉梅
上海復(fù)宏漢霖生物醫(yī)藥有限公司高級(jí)研究員
講座簡(jiǎn)介：
探討影響穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建要素，包括載體，宿主細(xì)胞等。基于平臺(tái)優(yōu)化篩選方式，在stable pool基礎(chǔ)上結(jié)合高通量技術(shù)進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株篩選，分享快速開發(fā)案例，實(shí)現(xiàn)快速、高效、穩(wěn)定細(xì)胞株篩選。
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- 有沒(méi)有哪位高手用血球計(jì)數(shù)器，上下數(shù)出來(lái)誤差不超過(guò)4%的？有什么技巧可以授之一二嗎？謝謝啦！對(duì)的對(duì)的，顯微鏡下看的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。是上下不超過(guò)10%....重復(fù)性高不？。。我做定性的時(shí)... 有沒(méi)有哪位高手用血球計(jì)數(shù)器，上下數(shù)出來(lái)誤差不超過(guò)4%的？有什么技巧可以授之一二嗎？謝謝啦！ 對(duì)的對(duì)的，顯微鏡下看的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 。是上下不超過(guò)10%.... 重復(fù)性高不？。。我做定性的時(shí)候都是亂數(shù)的。這次做定量+time course。要了我的老命了。 time course做完了。謝謝各位了?？偨Y(jié)一下： 一是要cell suspension要充分振蕩混勻，每次加樣都要； 二是能不做dilution就不做，數(shù)到100-300才能真正將誤差降低。 三是這么人工計(jì)數(shù)就是不準(zhǔn)。打死一個(gè)樣品做3次。要準(zhǔn)就要用機(jī)器數(shù)。^^ 展開
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前言
當(dāng)我們進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，很多時(shí)候都會(huì)對(duì)培養(yǎng)或者消化細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行計(jì)算，最常規(guī)的就是細(xì)胞計(jì)數(shù)了。
原始的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法是通過(guò)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，在顯微鏡下人工觀察細(xì)胞狀態(tài)判斷細(xì)胞死活，進(jìn)行計(jì)數(shù)。
顯微觀察是細(xì)胞計(jì)數(shù)的基本原理，但是人工細(xì)胞計(jì)數(shù)是一件非常耗時(shí)耗力的工作，特別是要面對(duì)大量樣本的計(jì)數(shù)需求時(shí)，因此就衍生出了細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。
我們常見(jiàn)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是這樣的：
圖源：網(wǎng)絡(luò)，侵刪
這些自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的原理又是怎樣的呢？
它們的底層原理是這樣的：
圖源：網(wǎng)絡(luò)，侵刪
其實(shí)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀就是一個(gè)簡(jiǎn)化版的顯微鏡，然后搭載了對(duì)圖片進(jìn)行識(shí)別的軟件功能，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的計(jì)數(shù)。
既然自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可以做到，那么專業(yè)顯微鏡一定可以做得更好。
Echo Rebel和傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀不同，其具有極高的普適性，無(wú)需細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的專用耗材，無(wú)論載玻片還是培養(yǎng)皿都可以進(jìn)行計(jì)數(shù)。
Echo Rebel的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是這樣的：
還可以是這樣的：
與傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀相比，Echo Rebel細(xì)胞計(jì)數(shù)采用嵌入式設(shè)計(jì)，與顯微鏡融合，細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)間短，普適性高，無(wú)需專用耗材，使用和維護(hù)成本低。
你以為這就結(jié)束了，不，我們還可以這樣：
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