概述

寡核苷酸是一類只有50個以下堿基的短鏈核苷酸的總稱（包括脫氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA的核苷酸）。

近幾年，隨著寡核苷酸療法在ZL各種疾病適應(yīng)癥方面取得了臨床上顯著的進展，已有多種寡核苷酸類藥物，如小干擾RNA (siRNA) 和反義寡核苷酸 (ASO) 藥物獲得了FDA上市批準。另外還有多種microRNA (miRNA) 和適配體 (Aptamer) 正在研發(fā)中。因此，更大量、更高純度的寡核苷酸產(chǎn)品的需求也隨之日益增長。

東曹生命科學提供多種具有高分辨率、選擇性的色譜柱和層析填料產(chǎn)品以滿足從分析到純化制備不同規(guī)模的應(yīng)用需求。

寡核苷酸的HPLC分離模式

下表中列舉了寡核苷酸HPLC分析的幾種分離模式及適用的分離條件。也可以通過連用MS進行檢測。

ZL性寡核苷酸是由固相化學合成法制成。在合成過程中會產(chǎn)生工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包含許多目標產(chǎn)物的類似物（分子量的差別：堿基數(shù)n-1、n、n+1等），磷酸基S化等的不對稱化合物、異構(gòu)體等。因此，雜質(zhì)的分析監(jiān)控對工藝和質(zhì)量控制就顯得十分重要。一般而言，通過陰離子交換色譜法即可實現(xiàn)這一分析需求。

寡核苷酸IEC-HPLC分析

下圖是使用TSKgel DNA-STAT陽離子交換色譜柱分離具有不同序列的4種寡核苷酸引物 (單鏈) 。

在IEC分離模式中，如果使用無孔填料的色譜柱可以提高分辨率。此款色譜柱采用的是親水性無孔樹脂填料，粒徑5μm，表面由開放型多層陰離子交換基團構(gòu)成。這些特性與創(chuàng)新的化學鍵合方法相結(jié)合，使其載量更高、操作壓力更低，非常適合于寡核苷酸的高分辨率分析。

寡核苷酸的純度檢測

在離子交換色譜柱中，可以對離子基團與主成分有一處不同的化合物進行分離，比如能夠分離n-1、n、n+1的化合物。下圖是TSKgel DNA-NPR陽離子交換色譜柱對13個堿基的硫代磷酸寡核苷酸粗樣分析的色譜圖。

TSKgel DNA-STAT色譜柱對粗制的寡核苷酸與純化后的樣品進行純度評估。

寡核苷酸的分析要點

1、根據(jù)核酸樣品的穩(wěn)定性和大小來選擇合適的洗脫液。如果核酸的穩(wěn)定性很高，可以采用堿性溶液 (NaOH，pH12) 和高溫60℃條件下分離，可提高分辨率。如果是穩(wěn)定性差的，則推薦使用pH7-8的中性洗脫液，溫度40℃條件下分離。

2、在樣品吸附強的情況下，可使用比NaCl或NaBr洗脫能力更強的NaClO₄進行梯度分離。

3、如果樣品是超巨大雙鏈DNA (如質(zhì)粒DNA)，使用TSKgel DEAE-NPR (4.6mm I.D.×3.5cm) 的話不僅可以獲得高分辨率，而且回收率也會更好。