大家都知道HPLC色譜柱的壽命是有限的，在使用過程中隨著時(shí)間的推移，其性能開始下降。你可以通過峰形和峰形之間的分離，柱背壓的不規(guī)律增加以及重影峰的出現(xiàn)來判斷HPLC色譜柱的性能出現(xiàn)了下降。色譜柱是昂貴的色譜耗材，平常使用完畢后需要保養(yǎng)。如果色譜柱真的發(fā)生了性能下降，有什么方法可以恢復(fù)呢?

        首先，如果色譜柱由于過載或使用不兼容的流動(dòng)相而結(jié)垢，是可以恢復(fù)的，但已經(jīng)損壞的色譜柱或已經(jīng)過使用壽命的色譜柱無法恢復(fù)，需要更換。

        色譜柱還原程序如下，供大家參考：

        反相柱

        反相分離是大多數(shù)HPLC分離中使用的主要操作模式。填料主要由C18，C4，CN，NH2和苯基固定相組成。建議以水-乙腈-異丙醇-庚烷-異丙醇-乙腈-流動(dòng)相的順序用10至20倍體積的溶劑洗脫

        正相柱（氨基，二醇，硝基，氨基固定相）

        用20倍體積的溶劑沖洗，按照庚烷-異丙醇-乙腈-

       水-異丙醇-庚烷的順序。

        GPC / GFC色譜柱

        用5倍體 積且PH值為3的0.1%磷酸鹽緩沖液沖洗。如果使用了保留力強(qiáng)的蛋白質(zhì)，則使用從水到乙腈再到水的60分鐘梯度液沖洗。

        色譜柱在使用前都要對其性能進(jìn)行考察，使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下（樣品、流動(dòng)相、流速、溫度）下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性，或分離度。進(jìn)行柱效比較時(shí)，還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是zui佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

        恒譜生色譜柱柱管由不銹鋼制成，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光，減小管壁效應(yīng)，提高柱效，柱中填充鍵合硅膠或聚合物填料。色譜柱基于高純硅膠，采用獨(dú)特鍵合技術(shù)，具有優(yōu)異的峰形，靈敏性好?；|(zhì)金屬含量低，對所有類型的分析物均表現(xiàn)完好峰形。機(jī)械強(qiáng)度高，穩(wěn)定性好，質(zhì)控嚴(yán)格，確保色譜柱性能和色譜柱的使用壽命。有多種尺寸規(guī)格可供選擇以適應(yīng)色譜工作者及其使用的不同需求。我們有專業(yè)的技術(shù)工程師團(tuán)隊(duì)為您的需求提供解決方案，歡迎前來咨詢了解！

已經(jīng)證實(shí)ACE HPLC色譜柱和ACE Excel UHPLC色譜柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和zhuo越的色譜柱壽命。

通過鍵合在硅膠固定相載體上的硅氧烷的酸化水解可以失去鍵合相，從而降低色譜柱的壽命。該酸水解隨著流動(dòng)相pH的降低和柱溫的升高而增加。

與C18相相比，較短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去鍵合相。此外，低純度的硅膠固定相載體和低表面覆蓋的固定相載體使得一些鍵合相更易于酸解。
由于使用超高純度的硅膠固定載體粒子以及鍵合相的極高表面覆蓋，ACE鍵合相表現(xiàn)出極高的穩(wěn)定性。（參見圖9）
盡管所有ACE鍵合相的穩(wěn)定性都很優(yōu)異，但是一些鍵合相并不像其它鍵合相那樣穩(wěn)定。例如，通常認(rèn)為C18鍵合比柱長較短的烷基相、PFP相和苯基鍵合相更穩(wěn)定。

實(shí)際上，典型的苯基固定相穩(wěn)定性不佳是該相在方法開發(fā)中不常被選擇的主要原因之一。
為了解決這個(gè)問題而開發(fā)了ACE C18-AR，其允許色譜分析利用強(qiáng)大的π-π和偶極-偶極分離機(jī)制，并仍然享有C18相的堅(jiān)固性及耐用性。

如圖10所示，ACE C18-AR不僅對典型的苯基鍵合相具有非常優(yōu)異的穩(wěn)定性，它甚至還比許多其他C18鍵合相表現(xiàn)出更佳的穩(wěn)定性。

類似地，ACE C18-PFP提供了多種分離機(jī)制，可以利用它們實(shí)現(xiàn)更佳的總體分離效果，同時(shí)從C18相的穩(wěn)定性中受益。

圖 9：酸穩(wěn)定性，pH 1.8

條件
色譜柱：ACE 4.6 x 150 mm
流動(dòng)相：50% CH3CN, 50%水
流速：1.0 mL/min
溫度：22 °C
分析物：菲

酸性暴露條件：
流動(dòng)相：50% CH3CN 50% 0.1%TFA（溶于水中）（pH 1.8）
流速：1.0 mL/min
溫度：22 ℃

圖10：加速柱穩(wěn)定性研究：pH 1.9時(shí)80℃

酸性暴露條件：
流動(dòng)相：5:95 MeOH/0.1% TFA（溶于水中）（pH 1.9）
流速：0.20 mL/min
溫度：80 ℃
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
分析物：菲

使用設(shè)計(jì)用于加速柱降解下的條件，ACE C18-AR相顯示保留損失極少，其壽命相當(dāng)于高度穩(wěn)定的ACE C18相。兩種固定相均由相同的超純硅膠而制成，而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾視作在高溫和低pH條件下具有極好穩(wěn)定性的固定相）。
正如預(yù)期的那樣，基于低純度硅膠（Waters Spherisorb ODS2）的C18鍵合柱在這些加速條件下壽命大大降低。
特別值得注意的是常規(guī)苯基色譜柱與ACE C18-AR的壽命比較結(jié)果。與ACE C18-AR相比，盡管使用高純度二氧化硅，苯基色譜柱的壽命仍降低，這表明ACE C18-AR可能適用于那些使用苯丙基色譜柱壽命短的應(yīng)用。

將HPLC和UHPLC連接到通常被稱為LC-MS的質(zhì)譜儀上已經(jīng)相當(dāng)普遍。

然而，質(zhì)譜對可能從HPLC/UHPLC色譜柱上洗脫下來的微量的鍵合相（稱為柱“流失”）非常敏感。柱

流失可能會干擾分析結(jié)果，并且重要的是，LC-MS應(yīng)用中所選擇的色譜柱具有足夠穩(wěn)定的鍵合相以避免過量的柱流失。

圖11表明ACE C18-PFP色譜柱幾乎沒有“流失”干擾LC-MS分析。

C18-PFP（以及ACE C18和ACEC18-AR）的穩(wěn)定性使得這些色譜柱更適合LC-MS應(yīng)用。

圖 11：ACE C18-PFP色譜柱的低柱流失使其成為LC/MS應(yīng)用中的理想選擇

條件
色譜柱尺寸：50 x 3.0 mm
流動(dòng)相：梯度：在5分鐘內(nèi)從5至95% B，95% B時(shí)持續(xù)5分鐘
A: 0.1％甲酸(溶于水中)
B: 0.1％甲酸(溶于乙腈中)
流速：0.43 mL/min
溫度：60oC
檢測：安捷倫1100 MSD ESI正離子快速掃描模式,快速掃描全50 – 1000 m/z
樣品：空白運(yùn)行

柱流失可能會干擾LC-MS應(yīng)用中目標(biāo)分析物的檢測和測量。

ACE C18-PFP色譜柱未顯示柱流失。

所有ACE色譜柱的低流失特性使其非常適合LC-MS應(yīng)用。

UHPLC色譜柱可能缺乏耐用性。加上入口篩板堵塞的可能性，您可能面臨色譜柱的耐用性不如HPLC色譜柱的問題。

ACE Excel色譜柱非常寬容，并提供您期望從HPLC色譜柱中獲得的相同耐用性和使用壽命。

ACE Excel將改變您對UHPLC色譜柱耐用性的看法。

ACE Excel色譜柱不僅填裝的更好，還采用了ZL的入口篩板設(shè)計(jì)，使其比其它UHPLC色譜柱更不容易被堵塞。

仍建議您像使用任何UHPLC色譜柱一樣過濾樣品和流動(dòng)相，但ACE Excel色譜柱比其他UHPLC色譜柱更為寬容，并提供與HPLC色譜柱相同的耐用性和使用壽命。

圖 12：ACE Excel色譜柱在耐用性方面有良好的口碑

將2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色譜柱在平均1,000 bar（14,500 psi）壓力下進(jìn)行2000多個(gè)梯度的運(yùn)行。

在該穩(wěn)定性研究結(jié)束時(shí)，柱效（塔板數(shù)）和保留時(shí)間基本保持不變。