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  兜紀詰司1869 2017-01-07 00:00:00

  酶活力測定常用的方法有終點法和動力學方法兩類。 終點法 測定完成一定量反應所需的時間，如α-淀粉酶的活力測定。因為碘對淀粉呈現(xiàn)藍色反應，當?shù)矸廴芤褐屑尤氲矸勖负?，碘的藍色反應消失而呈現(xiàn)紅棕色；碘對淀粉顏色反應消失的時間可表示淀粉酶活力的大小。碘對淀粉顏色反應消失花的時間越短，表示酶的活力越高。 動力學方法 測定一定時間內(nèi)所起的化學反應量。 ①比色法 如果酶反應的產(chǎn)物可與特定的化學試劑反應而生成穩(wěn)定的有色溶液，且生成顏色的深淺與產(chǎn)物的濃度在一定的范圍內(nèi)有線性關系可用此法。如蛋白酶的活力測定：蛋白酶可水解酪蛋白，產(chǎn)生的酪氨酸可與福林試劑反應生成穩(wěn)定的藍色化合物，在一定的濃度范圍內(nèi)，所生成藍色化合物顏色的深淺與酪氨酸的量之間有線性關系，可用于定量測定。 ②量氣法 主要用于有氣體產(chǎn)生的酶促反應。如氨基酸脫羧酶、脲酶的活力測定。產(chǎn)生的二氧化碳量可用特制的儀器如瓦氏呼吸儀測定之。根據(jù)氣體變化和時間的關系，即可求得酶反應的速度。 ③滴定法 如果產(chǎn)物之一是自由的酸性物質可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解，脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。 ④分光光度法 利用底物和產(chǎn)物光吸收性質的不同，可直接測定反應混合物中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量。幾乎所有的氧化還原酶都使用該法測定。如還原型輔酶Ⅰ(NADH2)和輔酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，而NAD和NADP在該波長下無吸收，脫氫酶類可用該法測定。該法測定迅速簡便，自動掃描分光光度計的使用對酶活力的快速準確的測定提供的極大的方便。 ⑤放射測量法 是酶活力測定中較常用的一種方法。一般用放射性同位素標記底物，在反應進行到一定程度時，分離帶放射性同位素標記的產(chǎn)物并進行測定，就可測知反應進行的速度。常用的同位素有3H，14C，32P，35S，131I等。如脲酶，將底物尿素用14C標記，產(chǎn)生的帶放射性的CO2氣體可用標準計數(shù)法進行測定。 ⑥酶偶聯(lián)分析 某些酶本身沒有合適的測定方法，但可偶聯(lián)另一個酶反應進行測定。其基本方法為：應用某一高度專一性的工具酶使被測酶反應能繼續(xù)進行到某一可直接連續(xù)且簡便準確測定階段的方法。如：被測E1反應的產(chǎn)物B是某一脫氫酶(E2)的底物，向反應體系中加入足量的脫氫酶和NAD+或NADPH+，使反應由A經(jīng)B繼續(xù)進行到C，然后測定NADH或NADPH的特征吸收光譜的變化，即可間接地測定E1的活力大小。如己糖激酶的活力測定即應用這一方法。注意：使用該法要求指示酶必須很純，且具有高度的專一性，以免干擾反應而給測定帶來麻煩。

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