HEPES是兩性離子有機化學緩沖劑，屬于二十個 Good 的緩沖區(qū)之一，它不與金屬離子結合，極易溶于水。經(jīng)常被添加到細胞培養(yǎng)基中使用。雖然它對細胞沒有營養(yǎng)，但是在細胞培養(yǎng)需要在 CO2 培養(yǎng)箱外進行長時間操作時，添加 10–25 mm HEPES 可提供額外的緩沖能力孵化器為細胞提供一個良好的PH環(huán)境。

HEPES 緩沖區(qū)具有以下特征：

HEPES 的 pKa 取決于溫度：例如①在 25oC：pKa= 7.48  ②在 37oC：pKa= 7.31

在水溶液中有良好的溶解性，水溶液無色透明；

化學性質(zhì)穩(wěn)定，對生物沒有毒性且對生物膜無明顯的滲透作用：

對紫外波無特征吸收，在波長小于230-240nm時才有微弱的吸收，因而不干擾通常的光度法測量。

不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度

HEPES除了在細胞培養(yǎng)基中的使用之外在其他生物研究中，也占有非常重要的地位，因為它不與金屬離子結合，所以在很多金屬離子研究中都可以使用它，它是三羥甲基氨基甲烷與磷酸鹽的良好替代品。HEPES 也是電子顯微鏡中蛋白質(zhì)沉積技術的常用緩沖液，因為它不會影響金屬基材。經(jīng)過評估并證明HEPES適合與兩性化合物一起使用，為等電聚焦應用產(chǎn)生小于 1 個 pH 單位寬的 pH 梯度。在谷氨酸結合試驗的推薦緩沖液中，HEPES也是作為shou選緩沖液，因為它可以防止與非受體材料結合。

德晟為專業(yè)生產(chǎn)生物緩沖劑的廠家，成立已有十多年，擁有十分豐富的研發(fā)生產(chǎn)經(jīng)驗與產(chǎn)品知識，可為客戶提供大量技術支持與售后保障。秉著以德為本，以誠為先的經(jīng)營理念。目前德晟生產(chǎn)的生物緩沖劑類產(chǎn)品有HEPES、MOPS、TRIS、TAPS 、 CAPS、 BICINE、 EPPS、 PEP等一系列生物緩沖液，如有需要歡迎隨時聯(lián)系我們！

HEPES中文名：羥乙基哌嗪乙磺酸 分了式：C8H18N2O4S。HEPES 它是一種兩性離子有機化學緩沖劑，對細胞無毒性作用，同時它也是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的PH值范圍，在PH值為7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。

HEPES的使用方法有兩種:

1、按照所需濃度直接加入到配置的培養(yǎng)溶液中，過濾除jun，每1000毫升培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，溶解后用1N NaOH調(diào) PH至7.2，過濾除jun后可使用。此時 HEPES的使用濃度為10mmol/L。  

2、配成100x貯存液(1mol/L)，取23.8gHEPES溶于90ml的雙蒸水中，用1NNaOH調(diào)PH至7.5-8.0，然后用水定容至100ml,過濾除jun分小瓶裝，4攝氏度至20攝氏度保存。使用前取99ml培養(yǎng)液加入1ml貯存液終應用濃度仍為10mmol/L。

HEPES是一種兩性緩沖液，溶于水，不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物，其在pH7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。多數(shù)情況下，不會干擾生物化學過程，可廣泛應用于多種生物化學反應：

1、HEPES常用于各種類型生物體的細胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑，細胞-細胞黏附，細胞短期聚集培養(yǎng)，清洗組織、細胞所用緩沖液；

2、在蛋白質(zhì)研究中，PIPES常用作陽離子交換色譜法中結合緩沖液的組分和洗脫習液； 

3、在DNA研究中，PIPES用作磷酸鈣和 DNA沉淀物形成體系的綏沖滴 AFM以及電穿孔實驗中的緩沖液。

德晟生化是一家專業(yè)生產(chǎn)生物緩沖劑的廠家，產(chǎn)品種類很多。2005年成立至今已經(jīng)有十幾年的研發(fā)生產(chǎn)經(jīng)驗，德晟所生產(chǎn)的HEPES緩沖劑，純度高、適用范圍廣。如有需要歡迎與我們?nèi)〉寐?lián)系！

如何選擇緩沖劑？

選擇緩沖體系，其解離常數(shù)pKa值應該在設定的pH上下一個pH值單位內(nèi)，因為緩沖液的pKa變化超過一個pH單位時，其緩沖能力就會明顯下降；

緩沖體系不應影響蛋白質(zhì)的活性或者DNA的穩(wěn)定性，并避免其他離子的干擾；

另外，還要考慮溫度的影響：溫度不僅對緩沖液有影響，對細胞也有影響，大多數(shù)動物細胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5，而在溫度下降到0℃時可達到8.0。

一、磷酸鹽緩沖液的優(yōu)缺點：

是使用很廣泛的一種緩沖劑，由于它有二級解離，所以緩沖的pH值范圍很廣，可配置各種pH值的酸性、堿性和中性緩沖液。

優(yōu)點：

易配成各種濃度

適用pH范圍寬

pH受溫度影響小

稀釋后pH變化小

缺點：

易與常見的鈣離子、鎂離子及重金屬離子締合成沉淀。

二、Tris緩沖液的優(yōu)缺點：

Tris緩沖液是在生物化學研究中使用較廣泛的一種緩沖劑，其本身為弱堿，常用有效pH在“中性”范圍。

優(yōu)點：

堿性較強，可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的但范圍pH緩沖液；

對生物化學過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀；

易吸收空氣中的CO2，所以配制的緩沖液要蓋嚴密封；

此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定干擾作用，所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。

缺點：

pH受濃度影響較大，稀釋10倍，pH變化大于0.1

溫度效應大，如4℃時pH=8.4，37℃時pH=7.4

三、HEPES緩沖液的優(yōu)缺點：

HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

優(yōu)點：

在開放式培養(yǎng)或細胞觀察時能維持較恒定的pH值，并對細胞無毒性作用。

缺點：

在高濃度時對一些細胞可能有毒，與其他緩沖劑相比價格略貴。

四、PIPES緩沖液的優(yōu)缺點：

PIPES是哌嗪緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。它是兩性離子Good's緩沖液，在6.1至7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有不同，PIPES的濃度僅為HEPES濃度的一半。

優(yōu)點：

該緩沖劑不會與金屬絡合，因此可用于含金屬離子的溶液；

可以用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細胞，以及代替草甘膦緩沖液。

缺點：

當溶液的pH值升高到6.5以上時，PIPES的游離酸才容易溶解，但是PIPES的鈉鹽很容易溶解；

如果使用的是游離酸形式的緩沖液，請使用氫氧化鈉將其轉化為鈉鹽，以提高在較低pH下的溶解度；

像HEPES一樣，PIPES不適用于涉及氧化還原反應的實驗，因為它會導致自由基的形成。