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- happyzxt222 2017-06-04 00:00:00
- 離心力唄
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- 244760452 2017-06-04 00:00:00
- 使用蔗糖密度梯度離心時，不同濃度的蔗糖為什么會分層 純化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度離心法，能得到比較純的病毒。其過程如下： 1、將收集的組織或臟器或其他，用玻璃勻漿器充分研磨后制成懸液，經(jīng)反復(fù)凍融3 次后，置- 20 ℃冰箱中，備用。 2、先以5000g離心15分鐘后，獲取上清夜，然后再20000g高速離心30分鐘后取上清夜。 3、接著10萬g超速離心2h，將沉淀用少量STE溶解。 4、先在超速離心管中加入5-8mL的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液，然后在離心管中依次加入30 % ， 45 % ， 60 %的蔗糖，加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h，發(fā)現(xiàn)在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶，用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來，分別收集到不同的瓶內(nèi)。 5、去蔗糖；用STE緩沖液適量稀釋純化的病毒，然后11萬g離心3h，用少量STE（根據(jù)沉淀的量決定加入多少）緩沖液把沉淀懸起，即Z后獲得了純化的病毒。-20度凍純備用，用時可用分光光度計測定其病毒含量。
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