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- 花朵朵的哆哆 2017-05-01 00:00:00
- 本品是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液.使用本品裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等.主要成分為50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.1% SDS. 使用本品裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度.由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度. 保存條件：4℃ 制備細胞裂解產(chǎn)物： 1、800g 4℃離心5 分鐘，收集細胞，估計細胞離心后的體積(PCV，106 cells ≈ 20ul PCV， 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每50~100ul PCV 加入5 倍體積的蛋白裂解液（250~500ul），冰浴中放置10 分鐘，且每隔5 分鐘在漩渦混合儀震蕩30 秒； 3、12000g 4℃離心10 分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得細胞總蛋白產(chǎn)物； 4、假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可95℃加熱5 分鐘，然后迅速冰浴5 分鐘，12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得細胞總蛋白產(chǎn)物. 制備組織裂解產(chǎn)物： 1、取50-100mg 組織在冰上剪成碎片，用預冷的PBS 洗滌2 次，離心棄去PBS； 2、加入0.5-1ml 預冷的蛋白裂解液； 3、4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40 次，直到95%的細胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分鐘，且每隔5 分鐘在漩渦混合儀震蕩30 秒； 4、12000g 4℃離心10 分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物； 5、假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可95℃加熱5 分鐘，然后迅速冰浴5 分鐘，12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物. 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃.
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- 細胞裂解緩沖液的主要成分——TRIS-HCL、EDTA
裂解是指細胞分裂或破裂的一種狀態(tài)，裂解緩沖液是一種有助于打開細胞的溶液，它可以在一些實驗分析需要提取細胞內(nèi)容物時進行使用，例如科學家在從細胞中提取DNA或蛋白質(zhì)進行分析時就必須使用裂解緩沖液來輔助完成。細胞裂解緩沖液種類有很多，其中較常見的一種是TRIS—HCL緩沖液。
TRIS—HCL可以保持細胞裂解緩沖液的PH值zui佳狀態(tài)，所以常用它作為裂解緩沖液的主要成分。裂解緩沖液有助于打開細胞，可以對細胞內(nèi)的物質(zhì)進行篩選，例如鹽、清潔劑、螯合劑和抑zhi劑，以及一些堿性化學品。它不僅可以區(qū)分篩選甚至還可以去除這些物質(zhì)。
裂解液除了生物緩沖劑之外，還包括一種螯合劑和抑zhi劑，例如乙二胺四乙酸（EDTA），因為這種化學物質(zhì)與帶有兩個正電荷的金屬離子（例如鎂和鈣）結合，可以使它們不能用于其他反應。許多 DNA 酶（咀嚼 DNA 的蛋白質(zhì)）和蛋白酶（將其他蛋白質(zhì)切碎的蛋白質(zhì)）需要鎂離子才能發(fā)揮作用，因此通過剝奪這些關鍵成分，EDTA 有助于降低蛋白酶或 DNA 酶的活性水平。
德晟為專業(yè)生產(chǎn)生物緩沖劑和EDTA的廠家，現(xiàn)在生產(chǎn)的生物緩沖劑類產(chǎn)品有TRIS、TRIS-HCL、 HEPES、 TAPS 、MOPS、 CAPS、 BICINE、 EPPS、 PEP等一系列生物緩沖液，目前成立已有十多年，擁有十分豐富的研發(fā)生產(chǎn)經(jīng)驗與產(chǎn)品知識，可為客戶提供大量技術支持與售后保障。如有需要歡迎隨時聯(lián)系我們！
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