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  花朵朵的哆哆 2017-06-04 00:00:00

  BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量的區(qū)別： 1、Bradford法測得的主要是堿性氨基酸和芳香族氨基酸，BCA則沒有選擇性 2、BCA法蛋白濃度定量是二價銅離子在堿性的條件下，可以被蛋白質(zhì)還原成一價銅離子（biuret reaction），一價銅離子和獨特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個銅離子，形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。 Bradford法蛋白定量是染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后引起染料Z大吸收的改變，從465nm變?yōu)?95nm，光吸收增加。蛋白質(zhì)染料復(fù)合物具有高的消光系數(shù)，因此大大提高了蛋白質(zhì)測定的靈敏度，Z低檢出量為1μg蛋白。染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合是很迅速的過程，大約需2min，結(jié)合物的顏色在1h內(nèi)是穩(wěn)定的。一些陽離子，如K+，Na+，Mg2+，(NH 4 ) 2 SO 4，乙醇等物質(zhì)不干擾測定，而大量的去污劑如TritonX100，SDS等嚴重干擾測定，少量的去污劑可通過用適當?shù)膶φ斩?。由于染色法簡單迅速，干擾物質(zhì)少，靈敏度高，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)含量的測定。

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