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氣相色譜儀如何檢測漏氣?具體詳細的操作步驟?

hebyoldxy 2012-07-05 14:41:30 556  瀏覽
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全部評論(4條)

  • jiming208123 2012-07-06 00:00:00
    聽聲音,用于漏氣比較嚴重的時候。(換柱子,換進樣墊,清洗內襯管時沒密封好)多為人為因素。 在氣相色譜變動過的氣路接口處用肥皂水涂抹,冒泡說明漏氣。 觀察穩(wěn)流閥的流量顯示,箭頭明顯回落的則可能該氣路漏氣。 用皂沫流量計測流量。

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  • 明SaME赱 2012-07-13 00:00:00
    問題好像很簡單啊,從供氣氣瓶壓力閥(高壓表、低壓表),氣路上的接頭、分氣閥、進色譜的接頭,色譜儀內部的表(一般安氣路時測試過就可以了),柱箱內(所用色譜柱與進樣口及檢測器的接頭)這些部位用試漏液(商品也可以自制,水+一點洗滌劑,)在供氣的狀態(tài)下都點到。冒泡就說明漏,緊固或者重新連接。平時檢查只需要檢查氣相色譜儀外部的氣路接頭就可以了。

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  • 啊健身房地方 2012-07-06 00:00:00
    氣相色譜儀,在氣體檢測的方法暫時來說是Z高端,Z可靠的。精度是很高的。能檢測到很低的濃度。 具體操作方式是: 1、開機 2、要是機子是擴散式檢測的方式的話就只要注意看顯示屏,要是是管道式的話就先通氣然后注意顯示屏讀數。 3、只要有讀數了一般就是有氣體泄漏了。

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  • 石上清泉1118 2017-11-25 00:00:00
    一般來說,你在安裝完畢后,或是好久沒有使用的儀器以及出現的狀況很象漏氣時才有必要進行漏氣檢查。而出現漏氣情況多是感覺流量使用過大,或是儀器無法準備好,或是有漏氣報警等。 漏氣點其實是很有限的。 載氣來說,有以下幾個點,鋼瓶與壓力表連接處,壓力表與管線連接處,管線與凈化氣連接處(含進口與出口)、三通接口、與氣相色譜EPC接口(含進口與出口)、分流進出口、色譜柱接口及色譜柱與檢測器接口。 檢測漏氣的辦法很簡單,就是把儀器打開后不升溫,保證載氣通過,然后取一瓶皂液(可以自己配,用點洗衣粉加些水就行,也可以買來用,買的效果好,用后不留痕跡)分別在這些接口處涂一些泡沫,注意,不要弄太多的水,盡量用泡沫,看哪個地方有氣泡吹起來,哪就是漏點了。其實,Z常見的漏點,就是氣瓶處和進樣口。而進樣口,柱溫箱內還有檢測器等一般不建議用皂液,除非實在無法找到漏點了,再進行全面涂皂液檢查,而通常的做法是通過更換進樣墊或擰緊進樣墊的辦法解決就行了,或是在重新上一下柱子,畢竟在柱溫箱里,在里面涂皂液不但不方便,而且加熱的情況下有水對柱子也不太好。檢測器處也是一樣,通過重新上柱子的辦法就解決了。 至于空氣和氫氣用同樣的辦法來解決。

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環(huán)氧乙烷殘留檢測氣相色譜儀操作流程

在醫(yī)療用品及Y療器械生產中,主要采用環(huán)氧乙烷熏蒸的方法進行消毒處理。環(huán)氧乙烷(簡稱EO)為廣譜低溫滅菌劑,可以在常溫下殺滅各種微生物,具有穿透力強,滅菌效果好等特點。但是環(huán)氧乙烷具有一定的毒性,因此,利用氣相色譜儀測定醫(yī)療用品及Y療器械中殘留環(huán)氧乙烷含量非常重要。在所有口罩、防護服及醫(yī)療器械生產企業(yè)加班加點趕制產品的同時,需要做到的是,不止在生產數量上達到要求,還要提供質量上的保障。

對于此項分析檢測任務的氣相色譜儀不盡相同。潤揚儀器公司配置頂空進樣-FID檢測器氣相色譜儀GC-2020型,由于儀器全部采用模塊式集成芯片設計(全儀器沒有任何一只晶體管),穩(wěn)定性、重復性、準確度得到大幅提高,得到廣大客戶的普遍贊譽,其產品遍布山東、云南、新疆、河南、河北、天津、陜西、山西、湖南、廣東、內蒙古及東北三省。

為便于口罩、防護服及Y療器械生產企業(yè)便于此項任務的分析應用,潤揚儀器分析工程師總結出GC-2020環(huán)氧乙烷殘留檢測氣相色譜儀操作流程分享給大家參考,希望有所幫助。

硬件部分

1. 打開氣源(氫氣、空氣、氮氣)

打開氮氣鋼瓶(40升高純氣體)總閥(采用頂空進樣一般配置鋼瓶氣),一般旋擰2~3圈即可,再打開分壓閥,將鋼瓶分壓表壓力調至0.3MPa左右;打開氫氣發(fā)生器RYH-300和空氣發(fā)生器RYA-2000電源開關。

2. 開機加熱穩(wěn)定(柱箱、進樣口1、檢測器)

打開頂空進樣器AHS-16電源開關,頂空條件在出廠前已經設定好,儀器將自動升溫,然后打開氣相色譜儀電源開關,進入溫度控制界面,把柱箱、進樣口1、檢測器三個溫度后面的狀態(tài)“關”調為“開”(0是關,1是開),儀器會自動按照已設定的溫度進行升溫(最右側會顯示向上箭頭),當實際溫度和設定溫度達到一致后,三個溫度都顯示“=”,代表溫度就緒。

3. 儀器點火

當氣相色譜儀溫度就緒后,按一下“點火”按鈕,查看色譜工作站基線,如果出現高度差,則說明點火成功。

軟件部分

雙擊電腦桌面上N2000在線工作站,勾選通道1,確認,進入工作界面:實驗信息、方法、數據采集,點擊“數據采集”,橫坐標為時間,縱坐標為電壓,點擊右側上方“查看基線”,當基線平穩(wěn)后(近乎一條直線)方可進樣分析。

樣品制備(以口罩為例)

稱取口罩樣品1g,記下稱重量為m,剪成1cm見方碎片放入頂空瓶中,用移液槍加入5ml水(純水),壓蓋,放入頂空進樣器中,加熱預計20min,即可進樣分析,工作站會根據校正曲線求出結果記為C,單位為ug/ml,其計算公式為:5×C/m,計算結果單位為ug/g(單位質量環(huán)氧乙烷殘留量),如果不超過10ug/g即為合格(YY0469-2011,YY/T0969-2013,GB19083-2010)。

關機

把氣相色譜儀操作界面上柱箱、進樣口1、檢測器三個溫度后面的狀態(tài)“開”調為“關”,儀器開始降溫,關掉氫氣發(fā)生器和空氣發(fā)生器開關電源,關掉頂空進樣器電源,代色譜儀柱箱溫度降至60℃以下,即可關閉色譜儀電源,蕞后關上氮氣鋼瓶開關旋鈕。

EO標液濃度10mg/ml(10000ug/ml),校正曲線6個點濃度

1 ug/ml              0.5ul———5ml水

2 ug/ml              1.0ul———5ml水

4 ug/ml              2.0ul———5ml水

6 ug/ml              3.0ul———5ml水

8 ug/ml              4.0ul———5ml水

10 ug/ml             5.0ul———5ml水


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線蟲顯微注射如何操作?超詳細實驗步驟快來碼住

秀麗線蟲(Caenorhabditis elegans)是研究動物遺傳、個體發(fā)育和行為活動的重要模式生物,能夠研究從分子細胞水平到整體系統(tǒng)水平的相關生命活動的作用機理。顯微注射技術使用尖 端開口直徑為微米級的玻璃微管,將核酸注入線蟲的性腺,進而被成熟的卵細胞吸收,以染色體外遺傳物質的形式存在。而顯微注射技術是線蟲領域的核心技術,廣泛應用于研究線蟲的基因表達、功能和基因間的相互作用等。

(圖片來源于攝影師馬克奧-西奧卡)

實驗儀器及試劑

主要儀器包括:

顯微操縱器、拉制儀、注射泵、體式顯微鏡或倒置顯微鏡等。

試劑耗材包括:

瓊脂糖、礦物油、帶芯玻璃管、載玻片、拾取針、恢復緩沖液、OP50培養(yǎng)基、加樣針等。


實驗步驟

01、制備瓊脂糖固定板

移液槍取約50μl加熱溶解的2%瓊脂糖溶液滴在24mm×60 mm的載玻片上,用另一載玻片輕壓其上(小心氣泡產生),待瓊脂糖凝固后(約5分鐘),將上面的玻片從側面滑下即可。將制作好的瓊脂板室溫過夜或80℃干燥1小時后可疊放起來備用。

圖:瓊脂糖固定板的制備[1]。A. 用兩條膠帶將載玻片固定在干凈的工作臺上;B. 在載玻片中間滴一滴約50μl新鮮熱熔2% 瓊脂糖溶液;C. 將顯微鏡載玻片放在瓊脂糖滴上,輕輕按下使其變平。瓊脂糖凝固并取出顯微鏡載玻片。

02、制備注射針

注射針對于注射成功與否至關重要,使用水平拉制儀通過調節(jié)速度、拉力等參數可穩(wěn)定獲得兩根相同的注射針,建議使用有芯玻璃管進行拉制,其芯能夠使注射液迅速充滿針頭尖端,可以很好的排出氣泡。注射針的錐度一般5-7mm,尖端0.5-0.9μm。

MP-500有著前衛(wèi)智能的操作界面及加熱片限位槽等人性化設計,集安全性與人性化于一體,輕松滿足微電極相關實驗的需求。


03、制備注射液并加入注射針

根據實驗需求,選擇擬注射的物質,包括DNA、RNA、蛋白質等。注射物的純度是轉入效率高低的重要影響因素之一。通過注射針的尾端,用細長的加樣針將注射液灌入,等待數分鐘,觀察針尖有無氣泡。

04、注射體積校準

將注射針裝到注射泵上,吸入待注射液。在顯微鏡視野中心放一把微尺,上面放置一個裝適量礦物油的4厘米的培養(yǎng)皿。將注射針浸入礦物油中,注射一次得到一個液滴球,通過微尺測量球體直徑計算出注射的體積,調整注射液滴的大小使其符合所需的直徑。1 nL液滴的半徑為0.062 mm (V = 4/3πR3)。

瑞沃德R480玻璃微電極注射泵,注射精度高,運行穩(wěn)定,密封性良好,保證注射過程不會出現漏液情況。


05、破針

將玻片放在加入注射油的瓊脂墊上,移動微操使注射針與玻片邊緣相撞,注射針尖端被撞破,可觀察到有液泡自動滲出,該方法更易于刺入線蟲體內。

06、固定線蟲

一般挑選即將產卵或體內有少量卵的年輕成蟲進行注射,此時期性腺發(fā)育成熟,較易被DNA 轉染從而產生轉基因后代。使用拾取針將線蟲挑至瓊脂糖固定墊上,調整位置使性腺暴露,滴加注射油覆蓋整個蟲體。固定操作要迅速,否則線蟲容易脫水而死。

圖:固定在固定板上并準備注射的線蟲。箭頭表示在性腺中注射首 選部位。比例尺為50μm[1]。

07、注射

將瓊脂糖固定板放在載物臺上,顯微鏡下找到線蟲,調整焦距,將性腺部位聚焦在正確的平面。使用微操,將注射針尖刺入性腺。啟動微量注射泵進行注射,能觀察到注射液在性腺中快速流動,注射后的性腺被液體充滿。

圖:顯示注射物注射前(1)和注射后(2)的流動。箭頭標記性腺中的區(qū)域,注射物到達的位置[2]。

MM-500電動顯微操縱器與顯微鏡配合使用,可以完成人手不能從事的精細運動的顯微操作,體積小巧輕便,人性化中英文操作界面,操作起來更便捷。


08、恢復

在體視顯微鏡下,滴加恢復緩沖液至注射后的線蟲。一般等待2-5 min,線蟲活力恢復,即頭部左右搖擺,身體開始游動,即可挑至培養(yǎng)板上,進行20℃常規(guī)培養(yǎng)。

瑞沃德提供MP-500程控水平電極拉制儀、MM-500電動顯微操縱器、R480玻璃微電極注射泵組合方案,可對斑馬魚、線蟲等胚胎、幼體進行超精細顯微注射。

瑞沃德注射系統(tǒng)

注意事項[2]

a.瓊脂糖固定板:若線蟲在瓊脂糖固定板上短時間內死亡,則說明固定板過于干燥,可換瓊脂糖層稍薄的固定墊,因為瓊脂糖的主要作用是吸收線蟲的水分;若線蟲無法粘牢,則說明固定墊太濕或太薄,可繼續(xù)在烘箱內放一段時間,或將線蟲先粘在固定墊上后加油;

b.注射物質:注射DNA使用前要混勻并離心以避免雜質阻塞針頭。注射DNA的總濃度一般控制在200mg/L以下,因為較高濃度的DNA可能產生毒性或過量表達,從而影響下一代的表型恢復;

c.注射角度:注射針與性腺最 好呈銳角,推薦與頭部或尾部幾乎平行或呈15℃角;

d.實驗樣本:被注射的線蟲需要保證其食物充足,生長狀態(tài)健康;

f.注射后線蟲死亡率高:注射后等待恢復的時間過短或太長;可能是注射針尖太粗或注射DNA 被污染。針對此原因,可使用較細注射針,每次只注射一側性腺,若注射操作正確,但不產生轉基因線蟲,則可能是轉基因致死或注射核酸污染,可重新純化。

【參考文獻】

[1] Matthias Rieckher and Nektarios Tavernarakis. Generation of Caenorhabditis elegans Transgenic Animals by DNA Microinjection [J].Bio Protocol, 2017, 7(19): e2565.

[2] Krishna S. Ghanta et al., Microinjection for precision genome editing in Caenorhabditis elegans[J].Star Protocols, 2021, 2(3): 100748.


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