4-甲基咪唑（4-MI）是一種有致癌風(fēng)險的污染物，常作為生產(chǎn)焦糖色素的副產(chǎn)物出現(xiàn)在食品中。

本方案參照國標(biāo)GB 5009.282-2020，采用Copure?MCX小柱，以百香果汁及蜂蜜為基質(zhì)樣品，建立了不同基質(zhì)中4-甲基咪唑的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定法，低、中、高三水平的加標(biāo)都能獲得滿意結(jié)果。

樣品提取

準(zhǔn)確稱取均勻的樣品2.0 g（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，加入2 %甲酸水溶液至20 mL，混勻，10000 r/min離心5 min，上清液待凈化。

樣品凈化

活化：依次用5 mL甲醇，5 mL水活化固相萃取小柱。

上樣：取待凈化樣品10 mL過柱，棄掉流出的液體。

淋洗和洗脫：分別加入2 mL 2 %甲酸水、5 mL水、5 mL甲醇淋洗固相萃取小柱，棄去流出的液體；加入8 mL 5 %氨水甲醇洗脫固相萃取小柱，收集洗脫液。

重新溶解：45 ℃下氮吹至近干，加入乙腈-5 mmol/L乙酸銨（9+1）溶液1 mL復(fù)溶，渦旋30s，過0.22μm有機(jī)系濾膜，上機(jī)測試。

本方案所使用儀器：BN24智能水浴氮吹儀

取適量標(biāo)液，用乙腈-5 mmol/L乙酸銨（9+1）溶液稀釋成濃度分別為10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液。

儀器條件

1）色譜條件

儀器：UPLC-MS/MS

(Thermo Fisher TSQ Endura)

色譜柱：GOWON HILIC

(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)

流動相：A：5 mmol/L乙酸銨   B：乙腈

洗脫方式：梯度洗脫，見表1

流速：0.6 mL/min

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：5 μL

表1 梯度洗脫程序

2）質(zhì)譜條件

離子源：HESI

電噴霧電壓：3500 V

鞘氣壓力：35 arb

輔氣壓力：5 arb      

離子傳輸管：380 ℃

輔氣溫度：350 ℃

表2 組分名稱、保留時間

及特征離子一覽表（*為定量離子）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3  4-甲基咪唑加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 百香果汁中添加水平為100.0 μg/kg時

4-甲基咪唑的離子流圖

圖2 蜂蜜中添加水平為100.0 μg/kg時

4-甲基咪唑的離子流圖

訂購信息

本方案建立了以C18固相萃取柱對豬肉樣品中4種喹諾酮類藥物萃取凈化方法，進(jìn)行低中高三水平基質(zhì)加標(biāo)，都能獲得滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，回收率介于84%~115%之間，RSD值小于10 %。

實(shí)驗(yàn)過程

樣品提取

準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的豬肉樣品2.0 g于干凈離心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液，再加入1 g NaCl，2500 r/min渦旋提取10 min，8000 r/min離心2 min，取上清液5 mL氮吹近干，用5 mL 5 %甲酸水溶液復(fù)溶，待凈化。

樣品凈化

活化：5 mL甲醇，5 mL水

上樣：上述待凈化液

淋洗：5 mL 10 %甲醇水

洗脫：5 mL 10 %氨水甲醇

收集洗脫液，氮吹近干，初始流動相復(fù)溶，上機(jī)。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

選同類型空白豬肉樣品，按上述前處理方法進(jìn)行操作，取適量的標(biāo)液配制成合適濃度的基質(zhì)曲線。

儀器條件

色譜條件

儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

色譜柱：菲羅門 Titank C18 (2.1 mm×50 mm，3 μm)

流動相：A：水（0.1 %甲酸）   B：甲醇（0.1 %甲酸）

洗脫方式：梯度洗脫，見表1

流速：0.3 mL/min

柱溫：30℃

進(jìn)樣量：5 μL

質(zhì)譜條件

離子源：HESI

電噴霧電壓：3500 V

鞘氣壓力：40 arb

輔氣壓力：2 arb      

離子傳輸管：380 ℃

輔氣溫度：350 ℃

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3  4種喹諾酮類加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

訂購信息

前言

       多環(huán)芳烴化合物作為一類常見的有機(jī)污染物，廣泛存在于環(huán)境當(dāng)中。土壤因?yàn)槠浠|(zhì)復(fù)雜更是多環(huán)芳烴的常見載體。目前土壤中的多環(huán)芳烴污染已經(jīng)比較嚴(yán)重，在工業(yè)發(fā)達(dá)地區(qū)尤為突出，所以對土壤中多環(huán)芳烴含量的監(jiān)控也就尤為重要。

       加壓流體萃取技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種在高溫、高壓條件下快速處理固體或半固體樣品的方法，與常用的索氏提取、超聲提取、微波萃取技術(shù)等方法相比，具有節(jié)省溶劑、快速、回收率高、健康環(huán)保、自動化程度高等明顯優(yōu)勢。

       本實(shí)驗(yàn)參考方法HJ 805-2016和HJ 783-2016，簡要介紹了使用萊伯泰科全自動GX快速溶劑萃取儀Flex-HPSE提取土壤中的16種多環(huán)芳烴，SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)凈化，MultiVap-10定量平行濃縮儀濃縮后用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢測的一整套方法。實(shí)驗(yàn)方法簡便、回收率較高且平行性良好，適用于土壤中16種多環(huán)芳烴的檢測。

1、實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

Flex-HPSE全自動GX快速溶劑萃取儀（萊伯泰科公司）

SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）

MultiVap-10定量平行濃縮儀（萊伯泰科公司）

       7890B氣相色譜-5977B質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫公司）；

       16種多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)儲備液（200μg / mL，溶劑為正己烷）；

       二氯甲烷（色譜純）；正己烷（色譜純）；丙酮（色譜純）；

       硅膠固相萃取柱（1g/6mL，LabTech）；弗羅里硅土固相萃取柱（1g/6mL，LabTech）；

       硅藻土（置于馬弗爐中400℃烘4h，冷卻后貯于玻璃瓶中于干燥器內(nèi)保存）。

1.2標(biāo)準(zhǔn)工作液配置

       移取100μL的多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)儲備液至10mL的容量瓶，用正己烷定容至刻度，搖勻。配成濃度2μg/mL的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3土壤樣品處理

1.3.1 提取

       取研細(xì)過篩后的環(huán)境土樣20g，與8g硅藻土混合均勻，裝填至34mL的萃取罐中。同樣方法裝填好兩個萃取罐后，置于Flex-HPSE中（雙通道運(yùn)行，Z多可連續(xù)萃取30個樣品），萃取溶劑為丙酮－正己烷  (1：1，體積比) 混合溶液，系統(tǒng)壓力10.34Mpa，萃取溫度100℃，加熱平衡時間2min，靜態(tài)萃取時間5min，沖洗體積60%，N2吹掃60s。循環(huán)運(yùn)行兩次。萃取液收集到50mL濃縮杯中。

1.3.2 濃縮

       將濃縮杯置于MultiVap-10中，濃縮溫度35℃，使用定容模式。濃縮過程中使用正己烷淋洗杯壁，Z后置換溶劑為正己烷，樣品體積在1mL左右。

1.3.3 凈化

凈化過程采用弗羅里硅土柱凈化和硅膠柱凈化兩種方式。具體方法如下：

（1）弗羅里硅土柱凈化

       按照圖1方法進(jìn)行凈化實(shí)驗(yàn)，其中二氯甲烷正己烷溶液配比為1：9，體積比。收集液用MultiVap-10濃縮至近干，用正己烷定容至1mL，待測。

圖1.弗羅里硅土柱凈化方法

（2）硅膠柱凈化

       按照圖2方法進(jìn)行凈化實(shí)驗(yàn)，其中二氯甲烷正己烷溶液配比為1：1，體積比。收集液用MultiVap-10濃縮至近干，用正己烷定容至1mL，待測。

圖2.硅膠柱凈化方法

1.4樣品加標(biāo)處理

       按1.3.1方法裝填樣品過程中，加1mL的1.2方法所配的標(biāo)準(zhǔn)工作液至34mL的萃取罐中，然后按照1.3.1~1.3.3方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，兩種凈化實(shí)驗(yàn)各六組，Z后用正己烷定容至1mL，用來測定加標(biāo)回收率。

1.5 GC/MS檢測條件

       色譜柱：HP-5MS，30m*0.25mm*0.25μm；進(jìn)樣口溫度：280℃；不分流進(jìn)樣；柱流速：1.0mL/min；恒流模式；進(jìn)樣量：1.0μL；柱溫：50℃保持3min，以10℃/min升至280℃，保持12min。

       電子轟擊源（EI）；四極桿溫度：150℃；離子源溫度：230℃；輔助加熱溫度：290℃；掃描模式：全掃描；掃描范圍：45amu~450amu；溶劑延遲時間：10min。

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)液總離子流譜圖

圖3多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)液總離子流譜圖

2.2 加標(biāo)樣品的總離子流譜圖

圖4樣品加標(biāo)的總離子流譜圖

2.3 加標(biāo)樣品的回收率

表1硅膠柱凈化加標(biāo)樣品回收率

表2弗羅里硅土柱凈化加標(biāo)樣品回收率

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

       由表1和表2可知，加壓流體萃取-固相萃取-氣質(zhì)法測定土壤中的16種多環(huán)芳烴，加標(biāo)回收率為63.6%~116.9%， RSD為3.1%~8.8%。本方法測定的樣品加標(biāo)濃度為0.1mg/kg。

       用該方法進(jìn)行實(shí)際土壤樣品檢測，其中萘的含量為7.1 ug/kg，芴的含量為15.2ug/kg，二苯并[a, h]蒽的含量為12.5 ug/kg，其余13種多環(huán)芳烴未檢出。

       50mL濃縮杯同時適用于Flex-HPSE和MultiVap-10兩種儀器，實(shí)驗(yàn)過程中盡可能減少液體的轉(zhuǎn)移，能夠有效減少轉(zhuǎn)移過程中造成的損失。

       綜上所述，加壓流體萃取-固相萃取-氣質(zhì)法測定土壤中的16種多環(huán)芳烴這一實(shí)驗(yàn)中，萊伯泰科Flex-HPSE全自動GX快速溶劑萃取儀、SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)和MultiVap-10定量平行濃縮儀能夠GX、穩(wěn)定地達(dá)到實(shí)驗(yàn)的要求，可以提供領(lǐng)域范圍內(nèi)的良好應(yīng)用。

4、參考標(biāo)準(zhǔn)

1、HJ 805-2016 土壤和沉積物  多環(huán)芳烴的測定  氣相色譜-質(zhì)譜法

2、HJ 783-2016 土壤和沉積物  有機(jī)物的提取   加壓流體萃取法