4-甲基咪唑（4-MI）是一種有致癌風險的污染物，常作為生產(chǎn)焦糖色素的副產(chǎn)物出現(xiàn)在食品中。

本方案參照國標GB 5009.282-2020，采用Copure?MCX小柱，以百香果汁及蜂蜜為基質(zhì)樣品，建立了不同基質(zhì)中4-甲基咪唑的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定法，低、中、高三水平的加標都能獲得滿意結果。

樣品提取

準確稱取均勻的樣品2.0 g（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，加入2 %甲酸水溶液至20 mL，混勻，10000 r/min離心5 min，上清液待凈化。

樣品凈化

活化：依次用5 mL甲醇，5 mL水活化固相萃取小柱。

上樣：取待凈化樣品10 mL過柱，棄掉流出的液體。

淋洗和洗脫：分別加入2 mL 2 %甲酸水、5 mL水、5 mL甲醇淋洗固相萃取小柱，棄去流出的液體；加入8 mL 5 %氨水甲醇洗脫固相萃取小柱，收集洗脫液。

重新溶解：45 ℃下氮吹至近干，加入乙腈-5 mmol/L乙酸銨（9+1）溶液1 mL復溶，渦旋30s，過0.22μm有機系濾膜，上機測試。

本方案所使用儀器：BN24智能水浴氮吹儀

取適量標液，用乙腈-5 mmol/L乙酸銨（9+1）溶液稀釋成濃度分別為10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L的標準上機溶液。

儀器條件

1）色譜條件

儀器：UPLC-MS/MS

(Thermo Fisher TSQ Endura)

色譜柱：GOWON HILIC

(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)

流動相：A：5 mmol/L乙酸銨   B：乙腈

洗脫方式：梯度洗脫，見表1

流速：0.6 mL/min

柱溫：35℃

進樣量：5 μL

表1 梯度洗脫程序

2）質(zhì)譜條件

離子源：HESI

電噴霧電壓：3500 V

鞘氣壓力：35 arb

輔氣壓力：5 arb      

離子傳輸管：380 ℃

輔氣溫度：350 ℃

表2 組分名稱、保留時間

及特征離子一覽表（*為定量離子）

實驗結果

表3  4-甲基咪唑加標回收實驗結果

圖1 百香果汁中添加水平為100.0 μg/kg時

4-甲基咪唑的離子流圖

圖2 蜂蜜中添加水平為100.0 μg/kg時

4-甲基咪唑的離子流圖

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