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問答社區(qū)

無需專門dna提取既可以檢測基因么

曹毯場拜 2017-08-20 04:58:45 378  瀏覽
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  • yangle406 2017-08-21 00:00:00
    不可以。 基因檢測就是檢測的DNA。 不提取DNA就談不上基因檢測。 一個人有23對(46條)染色體,同一對染色體同一位置上的一對基因稱為等位基因,一般一個來自父親,一個來自母親。如果檢測到某個DNA位點的等位基因,一個與母親相同,另一個就應(yīng)與父親相同,否則就存在疑問了。 利用DNA進行親子鑒定,只要作十幾至幾十個DNA位點作檢測,如果全部一樣,就可以確定親子關(guān)系,如果有3個以上的位點不同,則可排除親子關(guān)系,有一兩個位點不同,則應(yīng)考慮基因突變的可能,加做一些位點的檢測進行辨別。DNA親子鑒定,否定親子關(guān)系的準確率幾近,肯定親子關(guān)系的準確率可達到99.99%。 DNA(脫氧核糖核酸)是人身體內(nèi)細胞的原子物質(zhì)。每個原子有46個染色體,另外,男性的精子細胞和女性的卵子,各有23個染色體,當精子和卵子結(jié)合的時候。這46個原子染色體就制造一個生命,因此,每人從生父處繼承一半的分子物質(zhì),而另一半則從生母處獲得。 DNA親子鑒定測試與傳統(tǒng)的血液測試有很大的不同。它可以在不同的樣本上進行測試,包括血液,腮腔細胞,組織細胞樣本和精液樣本。由于血液型號,例如A型,B型,O型或RH型,在人口中比較普遍,用于分辨每一個人,便不如DNA親子鑒定測試有效。除了真正雙胞胎外,每人的DNA是duyi無二的. 由于它是這樣獨特,就好像指紋一樣,用于親子鑒定,DNA是Z為有效的方法。我們的結(jié)果通常是比法庭上要求的還準確10到100倍。 通過遺傳標記的檢驗與分析來判斷父母與子女是否親生關(guān)系,稱之為親子試驗或親子鑒定。DNA是人體遺傳的基本載體,人類的染色體是由DNA構(gòu)成的,每個人體細胞有23對(46條)成對的染色體,其分別來自父親和母親。夫妻之間各自提供的23條染色體,在受精后相互配對,構(gòu)成了23對(46條)孩子的染色體。如此循環(huán)往復構(gòu)成生命的延續(xù)。 由于人體約有30億個堿基對構(gòu)成整個染色體系統(tǒng),而且在生殖細胞形成前的互換和組合是隨機的,所以世界上沒有任何兩個人具有完全相同的30億個核苷酸的組成序列,這就是人的遺傳多態(tài)性。盡管遺傳多態(tài)性的存在,但每一個人的染色體必然也只能來自其父母,這就是DNA親子鑒定的理論基礎(chǔ)。 傳統(tǒng)的血清方法能檢測紅細胞血型、白細胞血型、血清型和紅細胞酶型等,這些遺傳學標志為蛋白質(zhì)(包括糖蛋白)或多肽,容易失活而導致檢材得不到理想的檢驗結(jié)果。此外,這些遺傳標志均為基因編碼的產(chǎn)物,多態(tài)信息含量(PIC)有限,不能反映DNA編碼區(qū)的多態(tài)性,且這些遺傳標志存在生理性、病理性變異(如A型、O型血的人受大腸桿菌感染后,B抗原可能呈陽性。因此,其應(yīng)用價值有限。 DNA檢驗可彌補血清學方法的不足,故受到了法醫(yī)物證學工作者的高度關(guān)注,近幾年來,人類基因組研究的進展日新月異,而分子生物學技術(shù)也不斷完善,隨著基因組研究向各學科的不斷滲透,這些學科的進展達到了前所未有的高度。在法醫(yī)學上,STR位點和單核苷酸(SNP)位點檢測分別是第二代、第三代DNA分析技術(shù)的核心,是繼RFLPs(限制性片段長度多態(tài)性)VNTRs(可變數(shù)量串聯(lián)重復序列多態(tài)性)研究而發(fā)展起來的檢測技術(shù)。作為Z前沿的刑事生物技術(shù),DNA分析為法醫(yī)物證檢驗提供了科學、可靠和快捷的手段,使物證鑒定從個體排除過渡到了可以作同一認定的水平,DNA檢驗?zāi)苤苯诱J定犯罪、為兇殺案、強奸殺人案、碎尸案、強奸致孕案等重大疑難案件的偵破提供準確可靠的依據(jù)。隨著DNA技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用,DNA標志系統(tǒng)的檢測將成為破案的重要手段和途徑。此方法作為親子鑒定已經(jīng)是非常成熟的,也是國際上公認的Z好的一種方法。特別提到一點:同卵雙胞胎的DNA檢測結(jié)果是一樣的。

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無需衍生快速檢測水果中草甘膦及其代謝物

       草甘膦是一種非選擇性、無殘留滅生性除草劑,對多年生根雜草非常有效,廣泛用于橡膠、桑、茶、果園及甘蔗地。草甘膦的使用量逐年增加,給農(nóng)作物、人類健康以及生態(tài)環(huán)境帶來了一定的安全隱患。目前常用草甘膦及其代謝物的檢測方法通常存在操作時間長、需要衍生等問題。


方法優(yōu)勢

  迪馬科技在參考各種標準及文獻的基礎(chǔ)上,建立了水果中草甘膦及其代謝物氨甲基膦酸的測定SPE-UPLC-MS/MS法:采用水提取,ProElut GLY固相萃取專用柱凈化樣品,收集流出液,Dikma Polyamino HILIC色譜柱分離檢測,該方法特點:

       1) 前處理步驟少,提取液直接通過凈化柱接收流出液即可;

       2) 有機溶劑消耗量小,前處理過程中也無需使用酸堿試劑;

       3) 儀器分析簡單,樣品無需衍生直接分析,可提高結(jié)果穩(wěn)定性及減少實驗成本;

       4) 方法定量限0.05 mg/kg。


       以下為詳細解決方案,敬請參考!


水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法


01 適用范圍

       本方法適用于蘋果和橘子中氨甲基膦酸和草甘膦的檢測,定量限0.05 mg/kg。

02 標準品配制

       單標標準儲備液:準確稱取各標準品,用水配制成1000 μg/mL的單標標準儲備液。

       混標標準中間液:分別吸取各單標標準儲備液,用水配制成1.0 μg/mL和10 μg/mL的混標標準中間液。


03 提取

       取2 g樣品于50 mL離心管中,加入8 mL水、10 mL二氯甲烷,振蕩10 min,超聲10 min,8000 rpm離心5 min,取全部上清液于10 mL容量瓶中,用水定容至刻度,混勻,取5 mL,待凈化。


04 凈化

       ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938)

       1.活化:依次加入5 mL甲醇、5 mL水,棄去流出液;

       2.上樣:將待凈化液加入柱中,棄去前3 mL流出液,收集后2 mL流出液,混勻,濾液過0.22 μm尼龍濾膜,上機分析。

       注:同方法制備基質(zhì)匹配標準溶液。


05 UPLC-MS/MS條件


5.1 UPLC條件

       色譜柱:Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#:99302)

       流速:0.2 mL/min      

       進樣量:10 μL

       柱  溫:35 ℃

       流動相:A:乙腈 B:5 mM乙酸銨溶液,氨水調(diào)節(jié)至pH=11

       梯度設(shè)置:



5.2 質(zhì)譜條件

       電離模式:ESI

       掃描方式:負離子掃描 

       檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測    

       電噴霧電壓:-4500 V

       霧化氣壓力:60 psi       

       輔助氣壓力:60 psi

       氣簾氣壓力:35 psi       

       離子源溫度:550 ℃

       定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表:


06 添加回收結(jié)果

       水果中草甘膦和氨甲基膦酸的SPE-UPLC-MS/MS檢測添加回收結(jié)果:


草甘膦10 ng/mL標準品XIC圖

草甘膦50ng/mL標準品XIC圖

草甘膦100ng/mL標準品XIC圖

草甘膦250 ng/mL標準品XIC圖

草甘膦500 ng/mL標準品XIC圖

草甘膦的標準曲線圖

R^2= 0.9990

標準曲線濃度分別為: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL

氨甲基膦酸10 ng/mL標準品XIC圖

氨甲基膦酸50 ng/mL標準品XIC圖

氨甲基膦酸100 ng/mL標準品XIC圖

氨甲基瞵酸250ng/mL標準品XIC圖

氨甲基膦酸500ng/mL標準品XIC圖

氨甲基膦酸的標準曲線圖

R^2= 0.9990

標準曲線濃度分別為: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL


07 相關(guān)產(chǎn)品

       水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息:


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