參與評(píng)論

評(píng)論

登錄后參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

• 

  權(quán)的力量 2017-08-03 00:00:00

  就那植物來(lái)說(shuō)吧!原理是一致的.方法不同. 1植物組織提取基因組DNA 一、材料 幼嫩葉子. 二、設(shè)備 移液器，冷凍高速離心機(jī)，臺(tái)式高速離心機(jī)，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒. 三、試劑 1、提取緩沖液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl，pH8.0，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS. 2、提取緩沖液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240ul巰基乙醇，加水至300ml. 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液 5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無(wú)水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc. 四、操作步驟： 1.在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ，60℃水浴預(yù)熱. 2.幼苗或葉子5-10g，剪碎，在研缽中加液氮磨成粉狀后立即倒入預(yù)熱的離心管中，劇烈搖動(dòng)混勻，60℃水浴保溫30-60分鐘(時(shí)間長(zhǎng)，DNA產(chǎn)量高)，不時(shí)搖動(dòng). 3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，顛倒混勻(需帶手套，防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鐘，使水相和有機(jī)相分層(必要時(shí)可重新混勻). 4.室溫下5000rpm離心5分鐘. 5.仔細(xì)移取上清液至另一50ml離心管，加入1倍體積異丙醇，混勻，室溫放置片刻即出現(xiàn)絮狀DNA沉淀. 6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE.用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團(tuán)，在干凈吸水紙上吸干，轉(zhuǎn)入含TE的離心管中，DNA很快溶解于TE. 7.如DNA不形成絮狀沉淀，則可用5000rpm離心5分鐘，再將沉淀移入TE管中.這樣收集的沉淀，往往難溶解于TE，可在60℃水浴放置15分鐘以上，以幫助溶解. 8.將DNA溶液3000rpm離心5分鐘，上清液倒入干凈的5ml離心管. 9.加入5μl RNaseA(10μg/μl)，37℃ 10分鐘，除去RNA(RNA對(duì)DNA的操作、分析一般無(wú)影響，可省略該步驟）. 10.加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇，混勻，-20℃放置20分鐘左右，DNA形成絮狀沉淀. 11.用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗，再在干凈吸水紙上吸干. 12.將DNA重溶解于1ml TE，-20貯存. 13.取2μl DNA樣品在0.7% Agarose膠上電泳，檢測(cè)DNA的分子大小.同時(shí)取15μl稀釋20倍，測(cè)定OD260/OD280，檢測(cè)DNA含量及質(zhì)量. [注意] 5g樣品可保證獲得500μg DNA，足供RFLP、PCR等分析之用.

  贊(6)

  回復(fù)(0)

  評(píng)論

  評(píng)論

  登錄后參與評(píng)論