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- jy827981568 2013-11-20 00:00:00
- Western免疫印跡 (Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表 達產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。 原理 與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝 酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應的抗 體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋 白水平的表達。 ……………… 詳細資料請參考:on http://product.bio1000.com/101887/
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- ProteinSimple發(fā)布單細胞western blot系統(tǒng)
細胞異質(zhì)性是腫瘤研究,干細胞研究,免疫學研究的極其重要的研究方向。單細胞研究是
分析細胞異質(zhì)性的主要手段。單細胞組學研究也是jing準醫(yī)學首要的研究領域。
美國ProteinSimple公司首推基于芯片Western Blot技術,進行單個細胞蛋白質(zhì)表達水平定量分析系統(tǒng): Milo.
Milo具有極其強大的功能:
1. 單張芯片進行1000個單細胞western blot
2. 每個單細胞可進行數(shù)十個靶蛋白檢測
3. 僅需使用Western blot驗證抗體,具有抗體通用性
4. 基于western blot技術,蛋白進行分離后檢測,提高免疫學檢測特異性
5. 全程檢測只需4小時
- Western Blot歸一化講座精彩內(nèi)容提煉
期刊對Western Blot數(shù)據(jù)要求:
1. 內(nèi)參和目的蛋白在同一張印跡膜上;
2. zuihao選擇膜染色進行總蛋白歸一化;
3. 如果使用看家蛋白,需要提供看家蛋白表達穩(wěn)定并且不受實驗條件影響的證據(jù);
4. 成像方法的線性范圍需要提供。
看家蛋白一般常用于內(nèi)參質(zhì)控,整張膜上的weiyi質(zhì)控標準,但是看家蛋白一般表達量比較高,可能與目的蛋白不在一個線性范圍內(nèi),影響定量;并且看家蛋白證明在多種實驗條件下是會發(fā)生變化,例如:細胞融合,疾病和藥物ZL等等,影響定量jingzhun性。
總蛋白質(zhì)控直接在膜上檢測總蛋白,變異性小,誤差小,動態(tài)范圍更寬,使用整個泳道或泳道中大部分信號用于歸一化,而不是單一的條帶,例如JBC、Nature和Proteomics等期刊推薦使用總蛋白進行歸一化。
Azure可提供一站式Western Blot歸一化解決方案。
提供兩種總蛋白染色試劑Azure Red和TotalStainQ進行膜染色和總蛋白歸一化,AzureRed適合低豐度表達樣品,TotalStain更適合細胞裂解液樣品。
Azure Sapphire雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)和Azure Imager多功能分子成像系統(tǒng)可進行總蛋白歸一化,成像更簡單,歸一化更方便。
Azure成像系統(tǒng)除了可進行Western Blot成像外,功能非常強大,可進行凝膠、In cell Western孔板成像、2D和2D-DIGE、微陣列芯片、切片、動植物組織、小鼠成像、放射性同位素磷屏成像等。
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