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- 走巴走巴 2017-09-16 21:06:29
- 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA) ,蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot 都是抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測定。 原理都是靠免疫學(xué)的抗原抗體結(jié)合,二抗上帶酶,通過與底色反應(yīng)顯色。區(qū)別的話WB所檢測的一般是抗原,而Elisa抗原抗體都可以檢測。WB只能用抗體去檢測你的蛋白樣品。ELISA可以固定抗原也可以固定抗體。WB所檢測的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的;而Elisa無能為力,一鍋端了。
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- ProteinSimple發(fā)布單細(xì)胞western blot系統(tǒng)
細(xì)胞異質(zhì)性是腫瘤研究,干細(xì)胞研究,免疫學(xué)研究的極其重要的研究方向。單細(xì)胞研究是
分析細(xì)胞異質(zhì)性的主要手段。單細(xì)胞組學(xué)研究也是jing準(zhǔn)醫(yī)學(xué)首要的研究領(lǐng)域。
美國ProteinSimple公司首推基于芯片Western Blot技術(shù),進(jìn)行單個細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)水平定量分析系統(tǒng): Milo.
Milo具有極其強大的功能:
1. 單張芯片進(jìn)行1000個單細(xì)胞western blot
2. 每個單細(xì)胞可進(jìn)行數(shù)十個靶蛋白檢測
3. 僅需使用Western blot驗證抗體,具有抗體通用性
4. 基于western blot技術(shù),蛋白進(jìn)行分離后檢測,提高免疫學(xué)檢測特異性
5. 全程檢測只需4小時
- Western Blot歸一化講座精彩內(nèi)容提煉
期刊對Western Blot數(shù)據(jù)要求:
1. 內(nèi)參和目的蛋白在同一張印跡膜上;
2. zuihao選擇膜染色進(jìn)行總蛋白歸一化;
3. 如果使用看家蛋白,需要提供看家蛋白表達(dá)穩(wěn)定并且不受實驗條件影響的證據(jù);
4. 成像方法的線性范圍需要提供。
看家蛋白一般常用于內(nèi)參質(zhì)控,整張膜上的weiyi質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),但是看家蛋白一般表達(dá)量比較高,可能與目的蛋白不在一個線性范圍內(nèi),影響定量;并且看家蛋白證明在多種實驗條件下是會發(fā)生變化,例如:細(xì)胞融合,疾病和藥物ZL等等,影響定量jingzhun性。
總蛋白質(zhì)控直接在膜上檢測總蛋白,變異性小,誤差小,動態(tài)范圍更寬,使用整個泳道或泳道中大部分信號用于歸一化,而不是單一的條帶,例如JBC、Nature和Proteomics等期刊推薦使用總蛋白進(jìn)行歸一化。
Azure可提供一站式Western Blot歸一化解決方案。
提供兩種總蛋白染色試劑Azure Red和TotalStainQ進(jìn)行膜染色和總蛋白歸一化,AzureRed適合低豐度表達(dá)樣品,TotalStain更適合細(xì)胞裂解液樣品。
Azure Sapphire雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)和Azure Imager多功能分子成像系統(tǒng)可進(jìn)行總蛋白歸一化,成像更簡單,歸一化更方便。
Azure成像系統(tǒng)除了可進(jìn)行Western Blot成像外,功能非常強大,可進(jìn)行凝膠、In cell Western孔板成像、2D和2D-DIGE、微陣列芯片、切片、動植物組織、小鼠成像、放射性同位素磷屏成像等。
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