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  asd704616717a 2017-09-07 19:00:39

  DNA的變性、復(fù)性和雜交 1.變性，這是DNAZ重要的一個(gè)性質(zhì)。 ①DNA雙鏈之間以氫鍵連接，氫鍵是一種次級(jí)鍵，能量較低，易受破壞，在某些理化因素作用下，DNA分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂，使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)松散，變成單鏈，即為DNA變性。DNA變性只涉及二級(jí)結(jié)構(gòu)改變，不伴隨一級(jí)共價(jià)鍵的斷裂。②監(jiān)測(cè)DNA是否變性的一個(gè)Z常用的指標(biāo)是DNA在紫外區(qū)260nm波長(zhǎng)處的吸收光值變化。因?yàn)镈NA變性時(shí)，DNA雙鏈發(fā)生解離，共軛雙鍵更充分暴露，故DNA變性，DNA在260nm處的吸收光度值增加，并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系，這種關(guān)系叫做DNA的增色效應(yīng)。③DNA的變性從開始到解鏈完全，是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度內(nèi)完成的，在這一范圍內(nèi)，紫外光吸收值增加達(dá)到Z大增加值的50％時(shí)的溫度叫做DNA的解鏈溫度（Tm）。一種DNA分子的 Tm值的大小與其所含堿基中的 G＋C的比例相關(guān)也與DNA分子大小及變性條件有關(guān)，G+C的比例越高，DNA分子越長(zhǎng)，溶液離子強(qiáng)度越高，Tm值越大。④加熱、低鹽及強(qiáng)酸、強(qiáng)堿均可使DNA變性。 2.復(fù)性 變性DNA在適當(dāng)條件下，兩條互補(bǔ)鏈可重新恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這種現(xiàn)象稱為復(fù)性。熱變性的DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過程也叫退火，一般認(rèn)為，比Tm值低 25℃ 的溫度是DNA復(fù)性的Z佳條件。 3.DNA復(fù)性的實(shí)際應(yīng)用——雜交：通過變性DNA的復(fù)性性質(zhì)，我們可知道，DNA單鏈之間、RNA單鏈之間、一條DNA和一條RNA鏈之間只要存在序列互補(bǔ)配對(duì)區(qū)域，不管是整條鏈互補(bǔ)，還是部分序列互補(bǔ)，即可重新形成整條雙鏈或部分雙鏈，這即為核酸分子雜交，這在分子生物學(xué)研究中有極大的應(yīng)用，比如：可用于在基因組中對(duì)特異基因的定位及檢測(cè)，PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因等，很多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用的都是核酸分子雜交的原理，如Southern Blot， Northern Blot，包括PCR技術(shù)等。

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