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  蟲離口勿硒 2012-09-28 00:00:00

  培養(yǎng)基，滅菌鍋，百合不耐熱，需要空調(diào)。

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  凌云1980916 2012-09-28 00:00:00

  　試劑 　　· 乙醇。 　　· 吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ，4 – D （生長素類似物）。 　　· （）或次氯酸鈉。 　　· 6- 芐基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） 　　· MS 培養(yǎng)基 　　·0.1 mol/L NaOH與 0.1 mol/L HCl 　　配制培養(yǎng)基 　?。?1 ）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基： MS 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/L ， 2，4 – D 含量為 2 mg/L ，瓊脂10 g/L ）。 　?。?2 ）試驗培養(yǎng)基：在 MS 培養(yǎng)基中加入 IAA 和 6–BA 。 　　吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。 　　儀器設(shè)備 　　培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（ 100mL ），燒杯，量筒，組培瓶，組培蓋或封口膜，棉線，接種箱或超凈工作臺，分析天平，長鑷子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮紙。 　　培養(yǎng)基滅菌 　　將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至 pH 5.8 ，趁熱分裝于 100 mL組培瓶中，每瓶約 20 mL 。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，蓋上組培蓋，或蓋上封口膜并用棉線扎牢，然后在高壓滅菌鍋中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下滅菌 20 min 。取出組培瓶放在臺子上，冷卻后備用。接種操作所需的一切用具（如長鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時滅菌。 培養(yǎng)步驟　 　diyi步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細(xì)洗干凈，如用適當(dāng)?shù)乃⒆拥人⑾础０巡牧锨懈畛蛇m當(dāng)大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細(xì)小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴(yán)重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗，然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當(dāng)然，Z理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)—吐溫。 　　第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準(zhǔn)備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強(qiáng)，也很易殺傷植物細(xì)胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。 　　第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1—2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細(xì)胞的副作用注意：①酒精滲透性強(qiáng)，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細(xì)胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鐘。③的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂容易導(dǎo)致植物材料失綠，所以對于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入濃度為0.08—0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面的張力，達(dá)到更好的消毒效果。

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