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  zhaipintiao 2012-08-26 00:00:00

  植物組織培養(yǎng) 在無菌條件下，把花藥、子房，葉片，莖或根的一部分等接種到人工配制的培養(yǎng)基上，它們能夠生長發(fā)育成一個完整的植物體，這就是植物組織培養(yǎng)技術(shù)。 步驟的話，可以找一下北師大版的生物書，八年級上冊第90~91頁上，就有。

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  不怕凹凸 2012-08-26 00:00:00

  培養(yǎng)方法　　1、非試管微組織快繁 　　非試管微組織快繁技術(shù)是將外植體（一般要求帶一葉一芽）放置在室內(nèi)外普通沙子培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，利用植物腋芽自然倍增達到快速繁殖的目的。一般植物7～15天可以生長出根系。此技術(shù)投資低，操作環(huán)節(jié)少。 　　2、試管組織培養(yǎng) 　　試管組織培養(yǎng)是將外植體（即離體組織、器官或細胞）放置在組培瓶等器皿中在無菌的條件下進行組織培養(yǎng)獲得組培瓶苗。 培養(yǎng)步驟 　　diyi步，將采來的植物材料除去不用的部分，將需要的部分仔細洗干凈，如用適當?shù)乃⒆拥人⑾?。把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時，沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料，可裝入紗布袋內(nèi)沖洗。流水沖洗在污染嚴重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗，然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物，除去脂質(zhì)性的物質(zhì)，便于滅菌液的直接接觸。當然，Z理想的清洗物質(zhì)是表面活性物質(zhì)—吐溫。 　　第二步是對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內(nèi)完成，準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用，加之70%酒精穿透力強，也很易殺傷植物細胞，所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料，如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗，多層鱗片的休眠芽等等，以及主要取用內(nèi)部的材料，則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下，待酒精蒸發(fā)后再剝除外層，取用內(nèi)部材料。 　　第三步是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多，可根據(jù)情況選取1—2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，視采用的消毒液種類，涮洗3-l0次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意：①酒精滲透性強，幼嫩材料易在酒精中失綠，所以浸泡時間要短，防止酒精殺死植物細胞。②老熟材料，特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些，如種子可以浸泡5分鐘。③的滲透力弱，一般浸泡10分鐘左右，對植物材料的殺傷力不大。④漂容易導致植物材料失綠，所以對于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入濃度為0.08—0.12%的吐溫20或80（一種濕潤劑），可以降低植物材料表面的張力，達到更好的消毒效果。 培養(yǎng)特點 　　1、培養(yǎng)條件可以人為控制 　　組培采用的植物材料完全是在人為提供的培養(yǎng)基和小氣候環(huán)境條件下進行生長，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長極為有利，便于穩(wěn)定地進行周年培養(yǎng)生產(chǎn)。 　　2、生長周期短，繁殖率高 　　組培是由于人為控制培養(yǎng)條件，根據(jù)不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養(yǎng)條件，因此生長較快。另外，植株也比較小，往往20-30天為一個周期。所以，雖然組培需要一定設(shè)備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級數(shù)繁殖生產(chǎn)，故總體來說成本低廉，且能及時提供規(guī)格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗。 　　3、管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動化控制 　　植物組織培養(yǎng)是在一定的場所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營養(yǎng)、激素等條件，極利于高度集約化和高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動化控制生產(chǎn)。它是未來農(nóng)業(yè)工廠化育苗的發(fā)展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、FZ病蟲等一系列繁雜勞動，可以大大節(jié)省人力、物力及田間種植所需要的土地。 培養(yǎng)優(yōu)點 　　1、占用空間小，不受地區(qū)、季節(jié)限制。 　　2、培養(yǎng)脫毒作物 　　3、培養(yǎng)周期短 　　4、可用組培中的愈傷組織制取特殊的生化制品 　　5、可短時間大量繁殖，用于拯救瀕危植物 　　6、可誘導之分化成需要的器官，如根和芽 　　7、解決有些植物產(chǎn)種子少或無的難題， 　　8、不存在變異，可保持原母本的一切遺傳特征 　　9、投資少，經(jīng)濟效益高 　　10、繁殖方式多，SY品種多 培養(yǎng)材料采集 　　要根據(jù)培養(yǎng)目的適當選取材料，選擇原則：易于誘導、帶菌少。要選取植物組織內(nèi)部無菌的材料。這一方面要從健壯的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲的材料。另一方面要在晴天，Z好是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時取材料。因為健壯的植株和晴天光合呼吸旺盛的組織，有自身消毒作用，這種組織一般是無菌的。培養(yǎng)材料的消毒 　　從外界或室內(nèi)選取的植物材料，都不同程度地帶有各種微生物。這些污染源一旦帶人培養(yǎng)基，便會造成培養(yǎng)基污染。因此，植物材料必須經(jīng)嚴格的表面滅菌處理，再經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。 　　試劑 　　· 乙醇。 　　· 吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ，4 – D （生長素類似物）。 　　· （）或次氯酸鈉。 　　· 6- 芐基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） 　　· MS 培養(yǎng)基 　　·0.1 mol/L NaOH與 0.1 mol/L HCl 　　配制培養(yǎng)基 　?。?1 ）愈傷組織誘導培養(yǎng)基： MS 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/L ， 2，4 – D 含量為 2 mg/L ，瓊脂10 g/L ）。 　?。?2 ）試驗培養(yǎng)基：在 MS 培養(yǎng)基中加入 IAA 和 6–BA 。 　　吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。 　　儀器設(shè)備 　　培養(yǎng)室，高壓滅菌鍋，水浴鍋，解剖刀，三角燒瓶（ 100mL ），燒杯，量筒，組培瓶，組培蓋或封口膜，棉線，接種箱或超凈工作臺，分析天平，長鑷子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮紙。 　　培養(yǎng)基滅菌 　　將配好的培養(yǎng)基加入瓊脂加熱溶解，調(diào)至 pH 5.8 ，趁熱分裝于 100 mL組培瓶中，每瓶約 20 mL 。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，蓋上組培蓋，或蓋上封口膜并用棉線扎牢，然后在高壓滅菌鍋中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下滅菌 20 min 。取出組培瓶放在臺子上，冷卻后備用。接種操作所需的一切用具（如長鑷子、解剖刀、剪刀等）及滅菌水，需同時滅菌。 編輯本段組織培養(yǎng)分類 　　1、胚胎培養(yǎng) 　　指以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養(yǎng)。 　　2、器官培養(yǎng) 　　指以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體無菌培養(yǎng)，如根的根尖和切段，莖的莖尖、莖節(jié)和切段，葉的葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉，花器的花瓣、雄蕊（花藥、花絲）、胚珠、子房、果實等的離體無菌培養(yǎng)。 　　3、組織培養(yǎng) 　　指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、木質(zhì)部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無菌培養(yǎng)。這是狹義的植物組織培養(yǎng)。 　　4、細胞培養(yǎng) 　　指以單個游離細胞（如用果酸酶從組織中分離的體細胞，或花粉細胞，卵細胞）為接種體的離體無菌培養(yǎng)。 　　5、原生質(zhì)體培養(yǎng)。 　　指以除去細胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無菌培養(yǎng)。

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