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什么是iTRAQMS / MS技術(shù),操作步驟如何?

糯米諾米糯 2016-10-14 11:11:59 464  瀏覽
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參與評論

全部評論(1條)

  • 小啊帆帆 2016-10-15 00:00:00
    iTRAQ,同位素標簽相對定量,可以對肽段進行相對定量 MS / MS,二級質(zhì)譜也就是串聯(lián)質(zhì)譜,可以測定肽段得氨基酸序列 具體操作請參考文獻。iTRAQ就是用同位素質(zhì)量標簽對樣品(肽段)進行標記,然后進行2級質(zhì)譜鑒定。

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技術(shù)干貨 | 大腦中動脈缺血模型的操作步驟

本文節(jié)選自楊國源主編的《實驗卒中模型方法學(xué)》

書號:ISBN 978-7-313-21776-9


大鼠

       (1) 麻醉成功后以仰臥位固定于手術(shù)臺,常規(guī)備皮、消毒,取頸部正中切口,頸正中切口,鈍性分離頸部腺體組織、筋膜,暴露并分離頸總動脈( common carotid artery,CCA)、頸外動脈( external carotid arter,ECA)和頸內(nèi)動脈( internal carotid artery,ICA)。

瑞沃德呼吸&麻醉解決方案

       (2) 分離ICA及其顱外分支翼顎動脈,結(jié)扎翼顎動脈,保持CCA的唯yi分支ICA的開放。

       (3) 游離ECA主干,電凝閉塞ECA的分支,結(jié)扎遠心端并將其離斷。在ECA殘端用眼科剪剪開一“V”型小口,剪口之前用微動脈夾夾閉CCA和CA。將預(yù)處理過(浸泡肝素)的長2cm的4-0線栓小心地從ECA插入。

MCAO線栓

       (4) 去除ICA的微動脈夾后,插入尼龍線栓直至大腦中動脈的起始處,線栓插入17-18mm(見下圖)。根據(jù)筆者的經(jīng)驗,線栓插入的長度應(yīng)根據(jù)動物體重,如260~280g大鼠,插入深度約17mm,280g以上的大鼠,插入深度約18mm,總之,以遇到輕微的阻力為準,此時線栓正好進入顱內(nèi)的大腦前動脈,阻塞大腦中動脈的開口。


MCAO線栓法模型操作主要步驟示意圖

(a) 在左頸外動脈遠端做一切口,將線栓向頸總動脈方向插入,直至分叉口;

(b) 剪斷頸外動脈后,將線栓以頸總外/頸內(nèi)分又口為圓心逆時針旋轉(zhuǎn)180°角,同時結(jié)扎翼膠動脈;

(c) 沿著頸內(nèi)動脈方向進線,當達到15mm時要非常小心,緩慢進線,直至感覺到有輕微阻力為止。


       (5) 若要恢復(fù)大腦中動脈的血流,只需把線栓拔出,使頭端退到頸外動脈,頸總動脈的血流就可以再灌注到大腦中動脈。

       (6) 結(jié)扎消毒后逐層縫合皮下組織和皮膚,等動物麻醉蘇醒后放回籠中即可。

       (7) 手術(shù)結(jié)束后應(yīng)用激光散斑血流成像儀監(jiān)測大腦皮層血流,當看到大腦皮層血液血流降低70%~80%,說明模型制備成功。

       (8) 對照手術(shù)模型的制作步驟同前,但血管分離后不插入線栓,結(jié)扎消毒后縫合皮下組織及皮膚即可。


小鼠


       小鼠MCAO模型的制作與大鼠的基本相同,可不結(jié)扎翼顎動脈,而是在進線栓時調(diào)整角度小心避開。其他不同之處在于,線栓為5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅膠),長度為15mm。根據(jù)動物體重的具體情況,線栓插入頸內(nèi)動脈(10±0.5)mm即可,保證線栓正好進入顱內(nèi)的大腦前動脈,阻塞大腦中動脈的開口。


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芯片洗干儀操作步驟

本文圍繞芯片洗干儀的規(guī)范操作展開,核心在于通過標準化流程實現(xiàn)清洗與干燥的一致性、潔凈度與良率的穩(wěn)定。文章以可執(zhí)行的步驟和關(guān)鍵工藝參數(shù)為線索,幫助操作人員建立可追溯的作業(yè)方案,避免因誤操作導(dǎo)致污染或器件損傷。


在正式執(zhí)行前需完成前期準備:檢查設(shè)備狀態(tài)、確認腔體與管路無泄漏,校準液位與溫控傳感器,核對清洗液的配比與有效期,確保工作環(huán)境符合無塵要求。


步驟一,預(yù)沖洗。以去離子水低速流動清潔芯片表面,去除大顆粒與污染物。步驟二,清洗循環(huán),按工藝配方投放清洗液并維持規(guī)定溫度、濃度與泵速,使表面充分潤濕并去污。步驟三,再沖洗,采用高純水完成尾沖,降低離子與殘留物。步驟四,干燥,按腔體配置選擇熱風、真空或混合干燥,控制溫度、時間與干燥介質(zhì),避免水滴再附著。


工藝參數(shù)與質(zhì)量控制是核心。記錄批次號、清洗溫度、時間、液位、循環(huán)模式及干燥條件,完成后進行外觀檢查與殘留檢測,并保存參數(shù)數(shù)據(jù)以實現(xiàn)追溯與統(tǒng)計分析。


安全與維護方面,操作時佩戴防護用品,化學(xué)品存放在專用區(qū)域并確保通風良好;定期清潔濾網(wǎng)、密封圈和閥門,傳感器需做自檢以防漂移,發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)立即停機并報告。


通過上述規(guī)范化步驟,芯片洗干儀能夠提供穩(wěn)定的清洗與干燥效果,提升良率并降低返工風險。建議持續(xù)開展SOP培訓(xùn)、數(shù)據(jù)分析與現(xiàn)場審核,以確保工藝可重復(fù)、數(shù)據(jù)可追溯,建立以專業(yè)態(tài)度支撐的運維體系。本公司工藝團隊將以數(shù)據(jù)驅(qū)動的過程控制為基礎(chǔ),致力于提供可控、可溯、可擴展的設(shè)備操作方案。


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