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- 老玉米19671017 2017-05-25 21:35:38
- 本品是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。使用本品裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等。主要成分為50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40， 0.1% SDS。 使用本品裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有 較高濃度的去垢劑，不能用Bradford 法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。 保存條件：4℃ 制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物： 1、800g 4℃離心5 分鐘，收集細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積(PCV，106 cells ≈ 20ul PCV， 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每50~100ul PCV 加入5 倍體積的蛋白裂解液（250~500ul），冰浴中放置10 分鐘，且每隔5 分鐘在漩渦混合儀震蕩30 秒； 3、12000g 4℃離心10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物； 4、假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可95℃加熱5 分鐘，然后迅速冰浴5 分鐘，12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。 制備組織裂解產(chǎn)物： 1、取50-100mg 組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS 洗滌2 次，離心棄去PBS； 2、加入0.5-1ml 預(yù)冷的蛋白裂解液； 3、4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40 次，直到95%的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分鐘，且每 隔5 分鐘在漩渦混合儀震蕩30 秒； 4、12000g 4℃離心10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物； 5、假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可95℃加熱5 分鐘，然后迅速冰浴5 分鐘，12000g 4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物。 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃。
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