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  towerrt 2016-08-02 00:00:00

  有專門賣的細胞裂解液，需要添加蛋白酶YZ劑

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  小啦啦gg 2016-08-02 00:00:00

  裂解方法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解.化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法，通常會很少使DNA 斷裂.這兩種方法（包括SDS 和溶菌酶處理等）提取純化DNA中常用的方法.機械裂解可以更均一的裂解細胞，同化學裂解相比，機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性.機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞，但也會造成DNA 的斷裂. 一、機械裂解法主要有以下兩中： 1．熱休克（Thermal shock），既反復凍溶法，是一種常用的機械裂解方式比，通常由冷凍和解凍兩部分組成（freezing and thawing），.原理：由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度引起溶脹，使細胞結構破碎.冷凍通常在液氮或-20°C冰上進行，解凍可以在37、50、65 或100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和，但是很有效，有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率. 2．超聲波處理（Ultrasonication）既利用超聲加熱的方法，把細胞破碎.但這種處理會導致DNA 的斷裂，所以加熱不宜過劇烈，要設定好超聲時間和間隙時間，一般超聲時間不超過5秒，間隙時間Z好大于超聲時間，這些都有利于保護酶的活性.bead-beating 也是常用的機械處理方式，有報道指出bead-beating 比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好 雖然DNA產量較高，但通常得到的DNA片段較小. 二、 化學裂解和酶裂解法（在提核酸時聯(lián)合使用） 主要是裂解液處理法，細胞裂解液的主要目的有以下幾種：（1）利用去污劑破壞脂質雙分子層，破裂細胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白變性使其穩(wěn)定；（4）YZ蛋白酶活性. 主要根據不同的目的，裂解液的組成有所不同，主要有提取核酸和蛋白兩中.在提取RNA或DNA時，我們主要是要充分裂解細胞，得到更多的核酸；如果我們的目的是蛋白，那要根據蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液，在提取蛋白后，再根據實驗需要復性蛋白等.以下是細胞裂解中常用試劑和其作用： 50 mM Tris-HCl pH 7.4（緩沖體系），150 mM NaCl（等滲體系），1 mM PMSF （強大的蛋白酶YZ劑），1 mM EDTA（變性劑和穩(wěn)定劑），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶YZ劑），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶YZ劑），1% Triton x-100（破壞細胞），1% Sodium deoxycholate（中度變性劑和蛋白溶解劑），0.1% SDS（強變性劑和蛋白溶解劑）.7M 尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等.

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