HPLC系統(tǒng)能否有效運行取決于流動相和樣品不受化學(xué)雜質(zhì)或固體懸浮液的影響。對于HPLC流動相的處理和使用注意事項討論主要圍繞在流動相的制備和使用中應(yīng)采取的措施。對于樣品過濾的重要性討論主要圍繞在進(jìn)樣時清潔樣品的好處。

        HPLC色譜柱是HPLC系統(tǒng)中的重要組成部分，使用時需要細(xì)心使用，用完后要維護(hù)避免下次使用發(fā)生問題。經(jīng)常更換色譜柱是很昂貴的，因此為了節(jié)約成本，需要zui大程度地延長色譜柱的使用壽命。同時也要細(xì)心維護(hù)色譜柱，以便每次獲得結(jié)果保持準(zhǔn)確性和一致性。

        由于經(jīng)常使用色譜柱，化學(xué)雜質(zhì)和固體懸浮液顆粒等會逐漸積累，色譜性能在使用過程中開始下降。流動相或樣品中存在的大顆粒雜質(zhì)開始沉積在色譜柱的入口上，從而干擾流動的均勻性。較小的顆粒會導(dǎo)致背壓增加，導(dǎo)致阻塞固定相中的流路。

        污染物有哪些？

        1、反相分離中高度保留的化合物，例如脂肪酸。

        2、不可逆地保留的化合物，如殘留的蛋白物質(zhì)，在樣品提取時并未完全去除。解決這個問題可以在HPLC分析之前對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行去蛋白化。

        3、顆粒雜質(zhì)，可能是樣品未過濾，系統(tǒng)組件（例如泵或進(jìn)樣器中的密封件）的磨損導(dǎo)致產(chǎn)生顆粒雜質(zhì)。又或者是進(jìn)樣時溶劑中本身還有顆粒物雜質(zhì)，沒有過濾導(dǎo)致顆粒物質(zhì)進(jìn)入系統(tǒng)。建議使用溶劑進(jìn)樣口過濾器，過濾掉微小顆粒物質(zhì)，避免進(jìn)入到HPLC系統(tǒng)中。

        恒譜生2μ,5μ,10μ,20μm液相色譜儀流動相入口溶劑過濾器，保護(hù)泵、單向止回閥 、進(jìn)樣器 、色譜柱免受有害顆粒污染物的損壞；吸濾阻力較小，較大的圓柱形篩板表面積，幾乎沒有背壓；吸濾頭尺寸較小，可用于多種小瓶口的存儲池容器；不會將空氣引入系統(tǒng)，無氣泡進(jìn)入流動相管路，儲液瓶溶劑抽取利用率可達(dá)99%以上，大大減少瓶底溶劑因無法凈真空吸取而造成的浪費；設(shè)有多階管路接頭，兼容多種內(nèi)徑溶劑流動相管路，不需要更換吸濾頭即可匹配不同規(guī)格的吸管；產(chǎn)品兼 容性高，適用于各種品牌的HPLC系統(tǒng)。

        4、柱內(nèi)殘留緩沖液，干燥后導(dǎo)致結(jié)晶沉淀。使用色譜柱后用HPLC級純水或緩沖溶液洗滌色譜柱可防止此類鹽沉淀的形成。

        什么是保護(hù)柱？

        保護(hù)柱是安裝在進(jìn)樣器和分析柱之間的，截留導(dǎo)致色譜柱篩板堵塞、柱頭塌陷和柱效下降的化學(xué)物質(zhì)和顆粒物?；瘜W(xué)物質(zhì)和顆粒物會污染、堵塞色譜柱，給分析帶來不良影響等。這時通過在色譜柱前安裝分析保護(hù)柱可以防止其產(chǎn)生，能起保護(hù)色譜柱的作用。保護(hù)柱zui好與分析柱具有相同的填料，以消除分離的復(fù)雜性。保護(hù)柱的內(nèi)部ID應(yīng)與分析柱相當(dāng) ，以最小化背壓。保護(hù)柱需要定期更換，可根據(jù)例如背壓增加，峰展寬和峰保留時間的變化來決定更換的周期。

        恒譜生建議您可以有效地利用、定期更換色譜保護(hù)柱，以延長色譜柱的壽命。

         液相色譜儀除了日常維護(hù)保養(yǎng)外，使用高純度溶劑不僅能保護(hù)液相系統(tǒng)，也能增加結(jié)果的可靠性。HPLC級表示化學(xué)試劑的純度，是可在GX液相色譜中使用的試劑的純度，制備色譜法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC級試劑。

         樣品在注入液相系統(tǒng)前，必須選擇一種合適的HPLC溶劑。在反相GX液相色譜中，當(dāng)樣品溶劑與流動相的洗脫強(qiáng)度有差異,尤其是前者的洗脫強(qiáng)度較強(qiáng)時,就會產(chǎn)生峰的變形及柱效的降低。解決該問題最有效的方法是使用流動相作為溶劑溶解樣品,這樣既可以避免樣品溶劑和流動相之間任何強(qiáng)度或粘度的不匹配，也可以減少樣品分析時基線的漂移。溶劑在流動相中起著重要的作用，并有助于將進(jìn)樣品通過分離柱后輸送到檢測器。為了滿足不同的分析要求，可以購買不同純度等級的溶劑來使用，HPLC分析需要使用高純度的溶劑，但是同時也要考慮成本和實用性等方面。

         HPLC級溶劑的純度通常超過99.9％，并且瓶身標(biāo)簽上還會標(biāo)明其他雜質(zhì)的含量。但是雜質(zhì)會導(dǎo)致多余的峰，從而干擾色譜圖中的主峰，對我們的分析結(jié)果產(chǎn)生干擾。雜質(zhì)產(chǎn)生的原因有很多，可能溶劑純度不夠，可能是瓶身不干凈或者軟管不干凈，還可能是溶劑吸濾頭的過濾雜質(zhì)效果不好。恒譜生不銹鋼流動相進(jìn)樣口過濾器能安全有效地保護(hù)泵和止回閥，尺寸小，適用于各種品牌的HPLC系統(tǒng)和多種小瓶口的存儲池容器。吸濾阻力較小，幾乎沒有背壓和形成空化，兼容多種流動相管路，無需換吸濾頭即可配不同規(guī)格的吸管，過濾微粒污染物效果好，無氣泡，溶劑利用率高。

        在整個紫外線可見波長范圍內(nèi)，沒有溶劑是100％透明的，常用的HPLC溶劑在一定波長范圍內(nèi)顯示出透明性。大多數(shù)應(yīng)用中會使用紫外線檢測器，因此所選的溶劑應(yīng)該盡可能具有低的紫外線截止波長，讓大多數(shù)的樣品組分在高于截止值的波長處顯示出可測量的吸收度。除此之外，溶劑的粘度越高，填充柱中固定相的阻力將導(dǎo)致背壓越高，因此所選溶劑也應(yīng)具有低粘度才是比較理想的。

        大多數(shù)的溶劑在密封瓶中才能維持它的穩(wěn)定性，但某些溶劑的保存期限有限。使用時要注意查看使用期，注意在有效期內(nèi)使用，不要購買過多的溶劑避免ZH用不完產(chǎn)生了浪費行為。

      作為ZH的建議，所有溶劑在使用前通過進(jìn)樣口過濾器過濾并脫氣，這樣的預(yù)防措施將提高HPLC系統(tǒng)的使用壽命，也有助于增加分析結(jié)果的可靠性。