gao效液相色譜法在臨床實驗室中對不同體液中生物標(biāo)志物的分離和定量起了重要作用。HPLC與其他常規(guī)檢測器（例如UV，熒光和電化學(xué)檢測器）相比，更趨向于質(zhì)量敏感檢測。填充材料技術(shù)的進(jìn)步，例如亞微米表面多孔二氧化硅顆粒已經(jīng)被引入了超高壓液相色譜中，在不遇到高背壓的情況下提高了分離效率。

        GX液相色譜儀的系統(tǒng)壓力較高，色譜柱是產(chǎn)生系統(tǒng)壓力的主要部件，高背壓會影響很多方面比如反壓太高超過流通池的耐受壓力，會導(dǎo)致流通池的損壞。恒譜生液相色譜柱均一的粒徑保證了流動相穩(wěn)定的流動，并且確保色譜柱有著較低的柱壓。

        恒譜生分析保護(hù)柱也具有低背壓，不漏液，死體積少等優(yōu)點，能夠減少液相色譜系統(tǒng)內(nèi)的部分壓力。

         除此之外，其他先進(jìn)技術(shù)的引用與結(jié)合，在不同程度上優(yōu)化了液相色譜分析工作方法，例如GX的自動進(jìn)樣器，減少檢測器的細(xì)胞體積以及數(shù)據(jù)收集和分析的改進(jìn)等等。很多實驗室每天需要生成數(shù)百個樣本的多個參數(shù)的報告，這些方法都能節(jié)約工作時間與提升工作效率。

        臨床實驗室通常處理數(shù)百種生物流體樣本，例如血液，尿液和其他體液。需要有效的提取過程與快速分析相結(jié)合，才能快速處理如此繁重的工作，但又不影響分析的質(zhì)量，患者的ZL方法與報告的準(zhǔn)確性有很大關(guān)系，因此快又準(zhǔn)的報告是重中之重。

        本文簡要討論了臨床實驗室中一些常見的HPLC分析應(yīng)用。

        生物樣品需要事先處理和加工，以消除來自其他成分的干擾，尤其是在血液等液體的情況下。采用溶劑萃取，超濾和固相萃取等方式可防止對檢測產(chǎn)生干擾并且可防止色譜柱內(nèi)部堵塞。預(yù)防色譜柱堵塞還可以借助一些液相分析耗材配件的幫助，比如在色譜柱前添加預(yù)柱（保護(hù)柱）起到過濾顆粒物，化學(xué)物，雜質(zhì)等作用。這些污染物會污染色譜柱、堵塞色譜柱，恒譜生建議在色譜柱前安裝分析保護(hù)柱可以起保護(hù)色譜柱、防止堵塞、延長色譜柱的壽命等作用。

       除了安裝保護(hù)柱，還可以安裝在線過濾器來防止色譜柱堵塞，恒譜生在線過濾器由潔凈的高品質(zhì)不銹鋼部件組成，這些過濾器旨在減少色譜柱入口篩板的污染和堵塞問題。

        兒茶酚胺

        兒茶酚胺是一種含有兒茶酚和胺基的神經(jīng)類物質(zhì)。兒茶酚胺充當(dāng)神經(jīng)遞質(zhì)和腎上腺激素。去甲腎上腺素，腎上腺素和多巴胺是可用于診斷是否患有帕金森氏病，高血壓和肌營養(yǎng)不良。以前依靠使用電化學(xué)或熒光檢測法檢測尿液或血漿樣品中的兒茶酚胺含量，而使用HPLC檢測是一種便捷的新分析方法。

       維他命

         維他命在人體生長、代謝、發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。維他命在體內(nèi)是微量的，在除去存在于體液（例如血液和腦脊髓液）中的干擾化合物后，HPLC提供了靈敏且可靠的維他命估算技術(shù)。雖然這樣分析技術(shù)的成本十分高昂，但是由于具有超高靈敏度和快速處理繁重工作量的優(yōu)勢，一些大型臨床實驗室還是會采用這種技術(shù)。

           糖尿病監(jiān)測

          糖尿病是以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。HPLC能準(zhǔn)確定量地評估糖化血紅蛋白被證明是有效控制血糖的監(jiān)測技術(shù)。即使在收集樣本兩周后，也可以通過HPLC分析血紅蛋白HbA1c在專用紙上收集并干燥的血斑。該方法為患者長期血糖控制提供了高靈敏度的檢測。

液相色譜HPLC是一類分離與分析技術(shù)，其特點是以液體作為流動相，利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。液相色譜HPLC廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。

1 維護(hù)液相色譜柱

①建議檢測前樣品和流動相進(jìn)行過濾。
②建議每天做完樣品后及時進(jìn)行清洗。
③常規(guī)檢測，測試完后直接把色譜柱反向連接采用90%有機(jī)相沖洗45min，zui后保存在純甲醇或純乙腈中。
④使用緩沖鹽條件：
*等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。
*梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。
注意：過渡流動相是指有機(jī)相和水相比例與分析流動相相同比例，只是不含有緩沖鹽。
*緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機(jī)相反向沖洗60min，zui后保存在純有機(jī)溶劑中。
注意：如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜。

2 氨基柱使用一段時間后，柱效降低，峰形改變的恢FF法

用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

3 液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因：

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。
③可能柱超載，減少進(jìn)樣量。

4 HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量。
②樣品未從柱子中流出，可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子。
③樣品與檢測器不匹配，根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器。
④檢測器衰減太多，調(diào)整衰減即可。
⑤檢測器時間常數(shù)太大，解決辦法為降低時間參數(shù)。
⑥檢測器池窗污染，解決辦法為清洗池窗。
⑦檢測池中有氣泡，解決辦法為排氣。
⑧記錄儀測壓范圍不當(dāng)，調(diào)整電壓范圍即可。
⑨流動相流量不合適，調(diào)整流速即可。
⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線，解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

5 做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，找出原因并解決

①泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理。
②比例閥失效，更換比例閥即可。
③泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法。
⑤系統(tǒng)檢漏，找出漏點，密封即可。
⑥梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

6 HPLC柱驗收測試時柱壓過高是用戶常碰到的問題。

柱壓過高是HPLC柱用戶常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題。
①拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查。
②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。
③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查。只用于使用過的柱子。
④更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

7 出現(xiàn)峰展寬的原因

①樣品體積過大：用流動相配樣，總的樣品體積小于DY峰的15%。
②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散。
③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點。
④流動相粘度過高:增加柱溫，采用低粘度流動相。
⑤檢測池體積過大:用小體積池，卸下熱交換器。
⑥保留時間過長:等度洗脫時增加強(qiáng)溶劑含量，也可用梯度洗脫。
⑦柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至zui小。
⑧樣品過載:進(jìn)小濃度小體積樣品。

8 避免流動相出現(xiàn)氣泡

①流動相溶液中往往因溶解有氧氣或空氣而形成氣泡。
②液路阻力比較大，吸液時出現(xiàn)了真空氣泡。
③系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣排除干凈。
④在注入樣品時混入了空氣。

9 常用的實驗室脫氣方式

①加熱回流脫氣，脫氣效果zui佳，但無法保持。
②氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多。
③真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失。
④超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中zui常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。