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病毒核酸的提取需要注意哪些?

金陽汽車電器 2010-06-10 03:25:13 752  瀏覽
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  • hevdvjd 2010-06-11 00:00:00
    .一定要注意冰上操作,低溫離心。 2.戴口罩和勤換手套,去任何東西都要帶著手套去取。 3.每次去器材的時候都要用鑷子去夾,鑷子要在酒精燈上燒一下。 4.所有的器材都要經(jīng)過DEPC浸泡后高壓后才可以使用,所需要的氯仿,酒精,異丙醇等都保證沒有被RNA酶污染,不能用沒有泡過DEPC的槍頭去提取液體,一定要用DEPC浸泡過的槍頭去吸,如果發(fā)現(xiàn)試劑有可能被污染了,要立即更換。 5.吸取上清一定不要吸到中間層的蛋白,如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提,因為,吸到的蛋白很可能會對RNA產(chǎn)生降解作用。一定要少吸,不要貪多,RNA提取不要求量,更多的要求質(zhì)。 6.Z后用75%的酒精洗一次就可以,盡量減少RNA提取時間。 7.Z后一步,用DEPC水溶解RNA,不要用太多的體積,以保證RNA的濃度。 提取完后,電泳觀察結(jié)果,如果上面的兩條帶都比較清楚的話,說明RNA提取的不錯,可以一次多逆轉(zhuǎn)錄幾管,不要把RNA凍存,以后在逆轉(zhuǎn)錄的效果不好。 1. SARS病毒樣品是具有高度傳染性的樣品,樣品的采集、保存、運(yùn)輸、處理、實驗應(yīng)遵循國家相應(yīng)的管理規(guī)范和生物安全條例,進(jìn)行樣品處理時必須做好相關(guān)的保護(hù)措施,并在P3實驗室條件下小心操作,防止樣品飛濺,以確保實驗人員安全。 2. 本試劑盒只適用于體外檢測。 3. 實驗請分區(qū)操作:diyi區(qū)為配液區(qū):用來準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑;第二區(qū)為樣品提取區(qū):準(zhǔn)備樣品和對照品處理;第三區(qū)為擴(kuò)增區(qū):PCR擴(kuò)增檢測。各區(qū)物品均為專用,不得交叉使用,避免污染,實驗后立即清潔工作臺。 4. 本試劑盒中,樣品提取液可室溫避光保存,由于提取液低溫易結(jié)晶,為方便使用可先將提取液稍微加熱促溶,待結(jié)晶溶解后,再置于室溫避光處儲存。 5. 試劑盒各樣品管使用前,充分融化后混勻,并稍微離心。反應(yīng)液分裝時和加模板時都應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,上機(jī)前各反應(yīng)管注意蓋緊,以免熒光物質(zhì)污染儀器。 6. 擴(kuò)增后,應(yīng)避免打開PCR反應(yīng)管,以免造成污染,廢棄物品務(wù)請滅菌消毒后丟棄。工作臺及各物品定期用10%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈處理。 7. 由于SARS為RNA病毒,提取過程中應(yīng)特別注意防止RNA酶對其的降解作用,所用加樣器、離心管、槍尖等均為專用,操作人員需穿潔凈實驗服,戴一次性手套和口罩,并且要勤換手套,減少RNA酶污染及交叉污染風(fēng)險。 8. 本試劑所用的控制品為人工合成蛋白外殼包裹的假病毒,無感染性。

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ZL的電磁分離技術(shù),可實現(xiàn)獨(dú)有的磁棒自旋轉(zhuǎn)式混勻,充分混勻反應(yīng)體系,液面平穩(wěn),有效避免孔間交叉污染。

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Prepito-D是一款桌面式小型自動化核酸提取儀,批處理通量為1~12,可對血液、血漿、咽拭子、唾液、組織等多種類型的樣本進(jìn)行自動化的核酸提取,提取過程中,試劑通過內(nèi)置分液器進(jìn)行自動添加。

 

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Chemagic360是基于電磁原理進(jìn)行磁珠分離的高通量自動化核酸提取儀,可從各種類型樣本中提取核酸,通過金屬棒自我旋轉(zhuǎn)混勻而不是上下震蕩方式進(jìn)行反應(yīng)體系的混勻,可以有效降低樣本間交叉污染的風(fēng)險;該系統(tǒng)規(guī)格為:90cm*90cm*95cm,內(nèi)置自動分液器,除樣本和部分小體積試劑需要手工加入提取體系之外,其余核酸提取試劑均自動加入,可大大減少手工操作時間。三個規(guī)格(12、24與96)提取頭可選,可實現(xiàn)1~96個/批次,可處理10μL~10mL的原始樣本,單孔反應(yīng)體系1.5mL~40mL,真正實現(xiàn)大體積樣品核酸提取。內(nèi)置控制電腦,觸摸屏操作。

 

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除了兼具Chemagic 360的所有性能特點(diǎn)之外,Chemagic Prime可以實現(xiàn)不同規(guī)格原始樣本管上機(jī),自動化條碼掃描,試劑分裝及提取產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移、分裝、濃度均一化等操作,還可以自動化構(gòu)建PCR反應(yīng)體系??刹⑿刑幚?塊96孔板,是一款真正高通量無人值守的全自動化核酸提取設(shè)備。

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