前言

MIQE是描述評(píng)估qPCR實(shí)驗(yàn)所需的最小信息，該指南是稿件投稿時(shí)需要同時(shí)提交的一個(gè)清單。通過(guò)作者提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)，審稿人可以評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)所用方法的可靠性。另外提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)所用試劑、序列和分析方法，其他研究人員可以利用這些信息進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于核酸提取MIQE有明確要求兩點(diǎn)——實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的定義及每一組的樣本數(shù)量。

無(wú)論采用手工法還是試劑盒，只要符合MIQE的要求并實(shí)現(xiàn)良好的可操作性和重現(xiàn)性，就是合理客觀(guān)的技術(shù)方法。MIQE在該部分操作中的要求又分為兩大塊——樣本描述和核酸提取方法。

樣本描述

?  樣本采集和處理的方法描述

? 樣本的來(lái)源描述（宏觀(guān)解剖還是激光顯微切割）

?  樣本是如何即時(shí)處理（保存條件及時(shí)間）

?  冷凍樣本的冷凍方法和時(shí)間

核酸提取

采取的提取方法：

1）手工法：小批量經(jīng)濟(jì)型

2）自動(dòng)化儀器：大批量高效型

按獲取的物質(zhì)可分為DNA和RNA：

◆ DNA：適合拷貝數(shù)變異、SNP分析等實(shí)驗(yàn)

◆ RNA：適合基因表達(dá)、長(zhǎng)非編碼RNA等實(shí)驗(yàn)

圖源：網(wǎng)絡(luò)，侵刪

按提取方法分為化學(xué)法和機(jī)械破碎法：

◆ 化學(xué)法：適合采用堿裂解法的樣本，質(zhì)粒提取、菌類(lèi)的提取

◆ 機(jī)械破碎法：比較堅(jiān)硬有一定韌性的物質(zhì)，動(dòng)植物組織

更推薦使用合適的商品化的核酸提取試劑盒，流程標(biāo)準(zhǔn)化程度更高，質(zhì)量更容易得到保證，這樣在方法描述時(shí)可以更簡(jiǎn)單一些，直接引用試劑盒的生產(chǎn)廠(chǎng)家、貨號(hào)和名稱(chēng)即可。

DNA酶或RNA酶的處理細(xì)節(jié)：

基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，RNA模板如果存在DNA污染，會(huì)嚴(yán)重干擾最后的結(jié)果。因此提取RNA時(shí)要加入DNA酶將DNA消化掉，工作濃度、處理溫度和時(shí)間要加以說(shuō)明，同時(shí)也要加入RNase抑制劑提供保護(hù)。使用柱純化試劑盒提取RNA時(shí)也可以在柱上進(jìn)行DNA消化。同樣的，提取DNA時(shí)也要將RNA消化掉，盡管殘留RNA對(duì)DNA為模板的qPCR實(shí)驗(yàn)影響小得多。

 Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)

?  數(shù)據(jù)可靠性：連續(xù)1000次實(shí)驗(yàn)后，結(jié)果高度一致。

?  應(yīng)用靈活性：提供多種qPCR應(yīng)用分析。

?  流程智能化：中英文用戶(hù)界面，觸控操作，可多機(jī)聯(lián)用。

?  在線(xiàn)便捷性：主機(jī)可獨(dú)立運(yùn)行qPCR程序，數(shù)據(jù)可USB、Wi-Fi等網(wǎng)絡(luò)傳輸。