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- EqGc2pe 2017-04-14 00:00:00
- 親和素生物素系統(tǒng)加熱到95度會分離 BAS-ELISA是在常規(guī)ELISA原理的基礎上，結合生物素(B)與親和素(A)間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統(tǒng)。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。 BAS用于檢測的基本方法可分為三大類。 diyi類是標記親和素連接生物化大分子反應體系，稱BA法，或標記親和素生物素法(LAB)。 第二類以親和素兩端分別連接生物素化大分子反應體系和標記生物素，稱為橋聯(lián)親和素-生物素法(BRAB)。 第三類是將親和素與酶標生物素共溫形成親和素-生物素-過氧化物酶復合物，再與生物素化的抗抗體接觸時，將抗原-抗體反應體系與ABC標記體系連成一體，稱為ABC法。這一方法可以將微量抗原的信號放大成千上萬倍，以便于檢測。 親和層析是將具有特殊結構的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時，與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質分開，然后選用適當?shù)南疵撘海?改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來。 生物素-親和素系統(tǒng)可以與親和層析的方法結合，大大提高純化蛋白質的純度，或者為已知配體尋找受體。步驟是首先將生物素共價結合到配體蛋白上，再將生物素化后的配體蛋白加入含有受體蛋白的混合物，然后將此混合物通過預先固定了親和素的層析柱，這時配體受體復合物就通過生物素-親和素系統(tǒng)停留在層析柱上，Z后通過選擇性洗脫獲得此受體配體蛋白復合物或者僅有受體。這一方法被廣泛運用于藥物研發(fā)行業(yè)，當人們發(fā)現(xiàn)某種藥物分子具有LX但是又不清楚它具體作用于哪種蛋白質時，可以將其生物素化然后把靶蛋白從成千上萬種蛋白質中“抓”出來。 生物素-親和素系統(tǒng)還可以用相似的方法分離DNA.方法是在DNA探針的一端掛上生物素，然后用其獲得目的DNA片段，再利用固定化的親和素回收這些DNA。 傳統(tǒng)的基因探針是由帶放射性的磷酸堿基合成的，我們可以用被生物素標記的磷酸堿基合成基因探針，避免了實驗過程中放射性物質可能造成的傷害。
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