今天是2019年的第yi個(gè)周一，從今天開始，安譜實(shí)驗(yàn)微信公眾號(hào)將在每周一（法定節(jié)假日除外）準(zhǔn)時(shí)發(fā)布一條干貨，力爭(zhēng)從用戶視角出發(fā)，用更多更全面的專業(yè)內(nèi)容，為廣大實(shí)驗(yàn)室科研人員搭建一個(gè)實(shí)用、專業(yè)的學(xué)習(xí)平臺(tái)，歡迎大家持續(xù)關(guān)注！

好了，現(xiàn)在就開始今天的干貨放送吧！

小柱“便秘”怎么辦？

在進(jìn)入主題之前，先簡(jiǎn)單介紹下固相萃取（SPE）技術(shù)。

固相萃?。⊿olid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱 SPE）技術(shù)，發(fā)展于上世紀(jì) 70 年代，由于其具有g(shù)ao效、可靠、消耗試劑少等優(yōu)點(diǎn)，在許多領(lǐng)域取代了傳統(tǒng)的液－液萃取而成為樣品前處理的有效手段， 在實(shí)驗(yàn)室中得到了越來越廣泛的應(yīng)用。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標(biāo)物提純，有效地將目標(biāo)物與干擾物分離，大大增強(qiáng)對(duì)分析物，特別是痕量分析物的檢出能力，提高了被測(cè)樣品的回收率。

萬千世界的奇妙，造就了樣品基質(zhì)的千差萬別，蔬菜，水果，肉蛋奶，水，土壤， 橡膠，紡織品等等，不管是食品還是環(huán)境的樣品，復(fù)雜程度也是各不相同。復(fù)雜程度一般的樣品可以用簡(jiǎn)單提取作為前處理方法，但是對(duì)于特別復(fù)雜的樣品就需要經(jīng)過特殊的前處理，比如用SPE 小柱，做進(jìn)一步的凈化，把目標(biāo)物和雜質(zhì)分離，進(jìn)而在色譜儀器上得到一個(gè)漂亮色譜圖，大家看現(xiàn)行的一些標(biāo)準(zhǔn)就會(huì)發(fā)現(xiàn)，有些樣品基質(zhì)的前處理肯定是會(huì)用到 SPE 手段的。

在用到 SPE 前處理的時(shí)候，各位分析檢測(cè)工程師碰到最煩人最令人抓狂的問題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況；過小柱過到令人崩潰，既然流速都保證不了，怎么敢奢求回收率。

沒關(guān)系，安譜實(shí)驗(yàn)憑借多年來在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累，教您幾招，治liao小柱“便秘”的難題。

SPE 的基本操作，包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫，五個(gè)步驟。問題無外乎出現(xiàn)在這幾個(gè)步驟里面，別急，我們一個(gè)個(gè)過來看。

活化平衡

一般反相或者離子交換類型的小柱分別用到甲醇和水進(jìn)行活化和平衡，正相小柱會(huì)用到石油醚或者正己烷來活化平衡。

1) 填料裝填過緊導(dǎo)致流速過慢。 可以通過加壓加快流速，或者購買對(duì)流速有嚴(yán)格質(zhì)控廠家的產(chǎn)品解決，安譜實(shí)驗(yàn)對(duì) CNW 小柱每個(gè)批次的流速都有嚴(yán)格的質(zhì)控范圍，質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì)被剔除。

2) 填料粒徑過小導(dǎo)致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下，100-200 目的 florisil 就會(huì)比60-100 目的更慢些。 可以根據(jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適規(guī)格的小柱。

3) 柱管體積差異。 500mg 3mL； 500mg 6mL， 這兩種規(guī)格形成的填料高度不一樣，顯然 500mg 6mL，直徑大，填料高度低，流速相對(duì)就快，就像地鐵站早高峰，閘口多，通過速率快，閘口少，自然就擁堵，通過速率慢。可根據(jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適柱管的小柱。

4) 溶劑順序加錯(cuò)。對(duì)于反相類型小柱，如果不小心把水當(dāng)成活化溶劑，就會(huì)出現(xiàn)流速很慢的問題，因?yàn)?strong style="position:relative;line-height:2em;font-size:16px;font-family:Microsoft YaHei;margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;" data-x-flag="8_58">水對(duì)于疏水性反相填料的浸潤性是很差的，所以不小心把水當(dāng)成甲醇來活化，可能等到花兒都謝了，它還是流不下來，注意別加錯(cuò)哦。

5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化，水平衡小柱，大家就會(huì)發(fā)現(xiàn)，水加入后，流速也會(huì)慢到讓你崩潰。 這是因?yàn)樗投燃淄榈幕ト苄圆钤斐傻?/span>，可以加入過渡溶劑甲醇來解決，甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶。

6) 空氣進(jìn)入填料。這個(gè)原因比較常見但也是比較難發(fā)現(xiàn)的原因， SPE 小柱是由篩板，填料，柱管組成，不是有機(jī)的整體，所以在運(yùn)輸尤其是長途運(yùn)輸?shù)倪^程中，就會(huì)出現(xiàn)微小的松動(dòng)，導(dǎo)致空氣進(jìn)入填料，一般不容易被肉眼所發(fā)現(xiàn)。含有空氣的填料在氣壓的作用下導(dǎo)致活化溶劑流下速度很慢。說到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱，會(huì)出現(xiàn)輕微的流速參差不齊的情況，可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后，再一起加溶劑。

上樣

由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性，篩板孔徑在 20um，在上樣之前需要把顆粒物給過濾掉，比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機(jī)溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉；對(duì)于一般的基質(zhì)，應(yīng)采用過濾，離心或者高速離心，換大孔徑填料等方式進(jìn)行處理，現(xiàn)在好多第三方檢測(cè)單位樣品量非常多，但是該做的前處理步驟不能省，否則對(duì)儀器的損壞，對(duì)數(shù)據(jù)的可靠性都會(huì)有一定的影響。

淋洗和洗脫

 一般在淋洗和洗脫這兩步出現(xiàn)流速慢的情形比較少，因?yàn)榱芟春拖疵摱际遣粠Щ|(zhì)的純?nèi)軇话闵蠘硬襟E沒有堵塞，就不會(huì)影響到淋洗和洗脫。可能出現(xiàn)流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后，因?yàn)橐坏└稍镄≈蜁?huì)使空氣進(jìn)入填料，這就回到了活化平衡導(dǎo)致流速慢的第 6 個(gè)原因，只要稍微加壓就可以解決問題了。

當(dāng)然我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)的時(shí)候，不是每個(gè)步驟都要求快，魯迅說過：欲速則不達(dá)，所以在小柱操作技巧里面，有兩個(gè)步驟是需要控制流速的， 分別是上樣和洗脫；這兩個(gè)過程是目標(biāo)物與柱填料通過分子間作用力進(jìn)行吸附和解吸附的過程，需要時(shí)間慢慢作用，大家一定要注意呦！

這一次干貨時(shí)間就為大家分享到這里，

下次再見！

　　本生教您如何選擇ELISA試劑盒的正確步驟

　　ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用，然而實(shí)驗(yàn)新手們面對(duì)各種各樣、動(dòng)則上上千種的ELISA試劑盒，內(nèi)心應(yīng)該是崩潰的。

　　各種廠家、品牌，各種種屬，各種因子，琳瑯滿目，質(zhì)量良莠不齊，如何浪里淘金，選擇既符合研究需求，又品質(zhì)上乘的 ELISA 試劑盒呢?

　　本生技術(shù)小編教你幾招，一眼“相中”、最合適的那個(gè)ELISA試劑盒!

　　首先，你要明確研究種屬：

　　一般來說，廠家都會(huì)在產(chǎn)品名稱上標(biāo)明種屬，且為單詞，檢索種屬的常用語言為英文。

　　如果您需對(duì)不同物種的同一因子進(jìn)行定量，建議優(yōu)先尋找適用于多個(gè)種屬的 ELISA 試劑盒，產(chǎn)品介紹中會(huì)注明

　　其次，要明確樣本類型：

　　不同廠家驗(yàn)證樣本類型不同，即使同一廠家不同試劑盒，其驗(yàn)證樣本類型也不盡相同。特別是復(fù)雜的血漿樣本，根據(jù)樣本處理方式的差異，分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿，因此購買前需仔細(xì)核對(duì)。

　　第三步：要會(huì)預(yù)測(cè)自己的目標(biāo)因子的濃度

　　一般來說，待測(cè)因子可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或資料獲得參考的檢測(cè)范圍，且正常人與疾病狀態(tài)存在差異。如熱門炎癥因子 IL-6，正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL，病人會(huì)顯著，CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。

　　因而，必要時(shí)進(jìn)行樣本的稀釋及選擇合適檢測(cè)范圍的試劑盒極其重要。

　　若濃度太低，可選擇高敏試劑盒;若不確定待測(cè)濃度或樣本間濃度差異較大，建議使用檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍更寬的化學(xué)發(fā)光法ELISA試劑盒。

　　如同樣為 IL-6 ELISA 試劑盒，各類型檢測(cè)范圍差異較大，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的試劑盒。

　　第四步：檢查試劑盒進(jìn)行過哪些質(zhì)控

　　質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)在說明書中即可找到，在購買前檢查試劑盒是否進(jìn)行過嚴(yán)格的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，包括批次內(nèi)(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實(shí)驗(yàn)、線性稀釋實(shí)驗(yàn)及交叉反應(yīng)測(cè)試等，每個(gè)數(shù)據(jù)都看一下，確保的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。

　　第五步：確定需檢測(cè)的因子數(shù)量

　　如果待測(cè)因子超過 5 個(gè)，且樣本量較小時(shí)，單因子 ELISA 檢測(cè)方法并不是選擇。

　　建議考慮多因子檢測(cè)方法，如固相芯片(樣本數(shù)量一般 5 個(gè)以內(nèi)，檢測(cè)指標(biāo)可達(dá)上百個(gè))及 Luminex 液相芯片方法 (檢測(cè)樣本多達(dá) 80 個(gè)，檢測(cè)指標(biāo)多達(dá) 50 個(gè))或微流控 ELISA 檢測(cè)系統(tǒng) Ella。

　　可節(jié)約樣本及時(shí)間成本，也可保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

　　第六步：預(yù)算評(píng)估

　　預(yù)算往往是大家優(yōu)先考慮的，實(shí)際上，不能夠一味講究產(chǎn)品價(jià)格，更需要考慮性價(jià)比。生物學(xué)是極其嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)，一致性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是基金、文章等評(píng)審過程中的因素，即使低廉的價(jià)格，不能夠重現(xiàn)結(jié)果，也是資源的另一種浪費(fèi)。

　　本生ELISA檢測(cè) 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

摘要：本文使用上海光譜儀器有限公司生產(chǎn)的氫化物發(fā)生器SP HS-100和原子吸收分光光度計(jì)SP-3801，采用氫化發(fā)生原子吸收分析技術(shù)測(cè)定蔬菜中硒的含量，該方法的靈敏度為0.17ug/L，線性相關(guān)系數(shù)（0-40ug/L）大于0.999，RSD<3%（n=7），結(jié)果較滿意。

關(guān)鍵詞：氫化物原子吸收光譜法，氫化物發(fā)生器（SPHS100），蔬菜，硒

一.引言

硒是人體健康的必需元素，具有重要的生理功能，硒具有、抗氧化、增強(qiáng)人體免疫力和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的合成等功能?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)證明，每日補(bǔ)充200微克硒對(duì)健康人是安全和有效的，但人體攝入過多的硒對(duì)健康也有很大的危害，硒Z高膳食攝入400微克/天。過量的硒可引起中毒，表現(xiàn)為頭發(fā)變干變脆、易脫落，指甲變脆、有白斑及縱紋、易脫落，皮膚損傷及神經(jīng)系統(tǒng)異常，嚴(yán)重者死亡。當(dāng)硒缺乏的時(shí)候，就很容易導(dǎo)致人體免疫能力下降，威脅人類健康，生命的四十多種疾病都與人體缺硒有關(guān)，如癌癥、心血管病、肝病、白內(nèi)障、胰臟疾病、糖尿病、生殖系統(tǒng)疾病等癥狀。氫化物原子吸收法測(cè)定硒方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，結(jié)果較滿意。

二.實(shí)驗(yàn)部分

儀器設(shè)備及試劑：

SP-3803火焰原子吸收分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)
SP-HS100全自動(dòng)氫化物發(fā)生器 (上海光譜儀器有限公司)
KJ-100微波消解儀（上海屹堯科技）
TTL-10S超純水機(jī)（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）
BS-124-S電子天平（德國賽多利斯科學(xué)儀器公司）
硒元素空心陰極燈(河北寧強(qiáng))
奶油生菜（星星美蔬）
硝酸、鹽酸、雙氧水，優(yōu)級(jí)純（國藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司）
硼氫化鉀，氫氧化鈉，分析純（國藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司）

測(cè)試條件如下：

表1 原子吸收儀器的測(cè)試條件

表2 氫化物條件

溶液配制：

硒標(biāo)準(zhǔn)溶液500mg/L：用移液槍移取10mL 1000mg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液于燒杯中，然后加入10mL濃鹽酸混勻，將燒杯放置在電熱板上加熱，待微沸數(shù)分鐘后取下冷卻至室溫，此溶液為500mg/L。

硒中間液50mg/L：用移液槍取500mg/L溶液5mL，用20%HCl定容至50mL。

硒標(biāo)準(zhǔn)使用液1mg/L：用移液槍取2mL硒中間液（50mg/L），用20%HCl定容至100mL，待用。

硒標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：用移液槍分別移取0、1.0、2.0、3.0、4.0mL的硒標(biāo)準(zhǔn)使用液，用20%HCl定容至100mL，此溶液為0， 10.0， 20.0， 30.0，40.0 ug/L。

1% KBH4：稱取1.5gNaOH和5.0g KBH4于燒杯中，加適量水溶解后轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，加水定容至刻度，待用。

1%HCl：量取10mL鹽酸溶液至1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，待用。

樣品制備與處理：

樣品用水洗凈，晾干，取可食部分，制成勻漿，儲(chǔ)于塑料瓶中。

微波消解：稱取0.8g已制備試樣于消化管中，加10mL硝酸、2mL過氧化氫，振搖混合均勻，于微波消解儀中消化，微波消化條件如下表所示，消解結(jié)束待冷卻后，將消化液轉(zhuǎn)移入錐形瓶中，加幾粒玻璃珠，在電熱板上加熱至近干。再加5mL鹽酸溶（6mol/L），繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o色并伴有白煙出現(xiàn)，冷卻，轉(zhuǎn)移，用20%鹽酸定容至20mL，混勻待測(cè)，同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)。

表3 微波消解程序

三. 標(biāo)準(zhǔn)曲線

使用上海光譜有限公司研制的全自動(dòng)氫化物發(fā)生器，該儀器采用原子吸收分光光度計(jì)與氫化物聯(lián)用測(cè)定硒。硒的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 硒的標(biāo)準(zhǔn)曲線（0～40μg/L）

四. 測(cè)試結(jié)果（見表4）

表4 奶油生菜中硒含量的測(cè)試結(jié)果

五. 結(jié)論

1.使用上海光譜儀器有限公司研制的全自動(dòng)氫化物發(fā)生器進(jìn)行了初步的應(yīng)用研究，在該裝置上進(jìn)行了水質(zhì)砷的含量的測(cè)定，儀器使用正常，結(jié)果滿意。

2.此方法校正曲線相關(guān)性大于0.999，方法的檢出限為0.17ug/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3.0%。

3.該儀器溫度、氣體流量可調(diào)，軟件自動(dòng)化控制，操作方便、簡(jiǎn)單。

（來源：上海光譜儀器有限公司）