PCR克隆出來的基因怎么確定是我想要的
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假設(shè)我知道，人的某段基因和老鼠的某段基因很相似，我用PCR的方式來克隆人的這段基因，因為我事先已經(jīng)知道了老鼠的這段基因的序列，所以我可以設(shè)計出引物。但是，我Z后得到了PCR的產(chǎn)物，我怎么確保我克隆出來的這段產(chǎn)物基因和老鼠的那段基因是一樣的序列呢？... 假設(shè)我知道，人的某段基因和老鼠的某段基因很相似，我用PCR的方式來克隆人的這段基因，因為我事先已經(jīng)知道了老鼠的這段基因的序列，所以我可以設(shè)計出引物。但是，我Z后得到了PCR的產(chǎn)物，我怎么確保我克隆出來的這段產(chǎn)物基因和老鼠的那段基因是一樣的序列呢？多謝各位??！ 展開
全部評論(6條)
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- 實施實事 2011-03-25 00:00:00
- Z快的方法是將兩者的基因進行雜交，要不然就得測序比對啦
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- 社會你陽哥y 2011-03-25 00:00:00
- 同源克隆我們一般都是測序，然后將序列與genebank下面的序列進行比對。。。同源性大于70%的話應(yīng)該就是你要的基因
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- 江訓(xùn)鋮 2011-03-25 00:00:00
- 一般是通過測序，這是目前比較靠譜的做法，把你擴增的片段回收，連接到買來的T載體上，做轉(zhuǎn)化實驗，把Z后得到的菌液送測序公司就可以了，得到的結(jié)果再與你之前有的老鼠的基因序列進行比較就可以了，可以用DNAMAN。
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- lindalyz66 2011-03-25 00:00:00
- 把PCR產(chǎn)物重組到T載體上，然后再轉(zhuǎn)化到細(xì)菌中。再測序。再在網(wǎng)上跟老鼠的基因比對。
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- 蕭擎峰 2011-03-25 00:00:00
- 。。。。。。。。扯淡的真多 一樓說的重組根本不需要，你只是想知道這個序列是不是目的序列的話直接把PCR產(chǎn)物寄給測序公司測序，花25塊錢，等兩三天出結(jié)果就行了。還搞什么酶切、熒光，不嫌累么？
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- 墩烙肇偈鶴壩 2011-03-25 00:00:00
- 將PCR產(chǎn)物凝膠電泳，切割回收DNA長度近似的條帶（凝膠回收），將回收提純的DNA克隆至質(zhì)粒載體（先酶切再連接），將載體轉(zhuǎn)化至細(xì)菌擴增，提取質(zhì)粒，利用質(zhì)粒上已知序列作為因為對目的DNA測序，利用Blast比對測序產(chǎn)物與老鼠基因的近似性。這是基因工程的一般通用步驟。 回答你問上面的問題，你可能沒有真正接觸過分子方向的實驗，你說的熒光標(biāo)記在理論上可行，但是成本太高，而且探針只能測定部分序列，無法對DNA全序列進行比對，綜合成本及效率，測序Z為省力。當(dāng)然，你也可以用酶切做一個基本判斷，如果基因的同源性很高，可以不用測序。
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