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- xiaofeitiandg 2015-12-22 00:00:00
- 選擇目的基因，并設(shè)計相應(yīng)引物； 用引物PCR擴增目的基因片段； 選擇合適（抗性標(biāo)記、酶切位點等）的克隆載體（為了保真擴增），并將PCR片段連接入克隆載體中；（一般用Taq酶的PCR產(chǎn)物在末尾會自帶一個A，可在Solution 1作用下與兩端各帶一個T的線性T載體直接相連） 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌，使之在含有抗生素的培養(yǎng)基上生長擴增； 從大腸桿菌中提取質(zhì)粒（即前面的連接產(chǎn)物），酶切鑒定和測序鑒定均無誤后將目的基因片段切下并與新的表達載體連接，然后再次轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中擴增，再提質(zhì)粒，即得到想要的目的基因片段克隆.
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