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目的基因連入表達載體后用不用先轉入DH5a擴增、酶切鑒定然后再轉入BL21?

福彩*程序n 2011-03-16 07:30:03 353  瀏覽
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全部評論(2條)

  • yangshao327 2011-03-17 00:00:00
    轉入DH5a之后,提純質(zhì)粒,酶切可以做初步的鑒定,Z好再做測序,從而能確定載體序列沒有發(fā)生變化,然后再轉到BL21做誘導表達。

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  • a340244226 2011-03-18 00:00:00
    Z好先轉入DH5-alpha擴增,這樣可以提高目的基因的數(shù)量與純度,經(jīng)酶切確認后,可獲得足夠多的DNA轉入BL21。當然,如果你對你的目的基因有自信(如用PCR從另外的質(zhì)粒上擴增而來,且條帶清洗專一),也可以直接轉入BL21做表達,這樣可以節(jié)約大約1.5-2天的時間。另外幫你找了一下,我們實驗室現(xiàn)在沒有細胞的protocol。

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