全部評(píng)論(1條)
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- 77808963 2017-10-25 00:00:00
- 1、 裂解液要預(yù)熱，以YZDNase，加速蛋白變性，促進(jìn)DNA溶解. 2、 酚一定要堿平衡.苯酚具有高度腐蝕性，飛濺到皮膚、粘膜和眼睛會(huì)造成損傷，因此應(yīng)注意防護(hù).氯仿易燃、易爆、易揮發(fā)，具有神經(jīng)毒作用，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù). 3、 各操作步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解. 4、 取各上清時(shí)，不應(yīng)貪多，以防非核酸類成分干擾. 5、 異丙醇，乙醇.NaAc，KAc等要預(yù)冷，以減少DNA的降解，促進(jìn)DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀. 6、 提取DNA過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤干等辦法進(jìn)行無核酸酶化處理. 7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制.
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- 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下：1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨；2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中... 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下： 1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨； 2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中； 3.充分混勻后，65℃水浴1h，期間不時(shí)輕緩震蕩； 4.12000rpm離心10min，取750μl上清液至另一離心管中； 5.加入等體積的Tris飽和酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），搖勻后12000rpm、離心10min； 6.取上層清液650μl，加入等體積氯仿·異戊醇（24:1），搖勻后12000rpm離心10min； 7.取550μl上清液至另一離心管中，加入等體積異丙醇； 10.-20℃放置1h或室溫下過夜； 11.12000rpm離心10min，倒棄上清液；70%冰冷乙醇洗滌沉淀2次； 12.倒棄上清液，風(fēng)干沉淀； 14.加100μlTE溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩? 可是不知道為什么Z后異丙醇沉淀出來的DNA居然是深綠色的，已經(jīng)接近黑色了。有的時(shí)候同樣的步驟做出來的又是白色或者黃色的，這到底是怎么回事??！希望知道的人給我個(gè)提示！ 會(huì)不會(huì)是因?yàn)楹吐确?異戊醇反應(yīng)的時(shí)間過長(zhǎng)？因?yàn)槲野l(fā)現(xiàn)我剩下的那些材料過一段時(shí)間后都變得很綠。 展開
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