食品中色素的提取
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要求有實(shí)驗原理藥品和步驟，越詳細(xì)越好，實(shí)驗本身不要太復(fù)雜，適合高中化學(xué)水平即可。
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- 東北不開槍 2006-09-21 00:00:00
- 番茄中含有番茄紅素和少量的B-胡蘿卜素，二者均屬于類胡蘿卜素。類胡蘿卜素為多烯類色素，不溶于水而溶于脂溶性有機(jī)溶劑。本實(shí)驗先用乙醇將番茄中的水脫去，再用二氯甲烷萃取類胡蘿卜素。因為二氯甲烷不與水混溶，故只有除去水分后才能有效地從組織中萃取出類胡蘿卜素。根據(jù)番茄紅素與B-胡蘿卜素極性的差別，用柱層析可以將它們分離。分離效果可以用薄層層析進(jìn)行檢驗。
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- jjmeifeng 2006-09-15 00:00:00
- http://www.foodmate.net/lesson/117/8.swf 實(shí)驗四 從番茄中提取番茄紅素和B-胡蘿卜素 一、引言 番茄中含有番茄紅素和少量的B-胡蘿卜素，二者均屬于類胡蘿卜素。類胡蘿卜素為多烯類色素，不溶于水而溶于脂溶性有機(jī)溶劑。本實(shí)驗先用乙醇將番茄中的水脫去，再用二氯甲烷萃取類胡蘿卜素。因為二氯甲烷不與水混溶，故只有除去水分后才能有效地從組織中萃取出類胡蘿卜素。根據(jù)番茄紅素與B-胡蘿卜素極性的差別，用柱層析可以將它們分離。分離效果可以用薄層層析進(jìn)行檢驗。 二、實(shí)驗材料和試劑 新鮮番茄（或番茄醬）。 95%乙醇；二氯甲烷；石油醚（60～90℃）；氯仿；中性或酸性氧化鋁（柱層析用）；環(huán)乙烷；硅膠G；飽和氯化鈉溶液；無水硫酸鈉。 三、實(shí)驗步驟 1. 原料處理與色素提取 稱取新鮮番茄漿[1]20g于100ml圓底燒瓶中，加95%乙醇40ml，搖勻，裝上回流冷凝管，在水浴上加熱回流5分鐘，趁熱抽濾，只將溶液倒出，殘渣留在瓶內(nèi)，加入30ml二氯甲烷，水浴上加熱回流5分鐘，將上層溶液傾出抽濾，固體仍保留在燒瓶內(nèi)，再加10ml二氯甲烷重復(fù)萃取一次。合并乙醇和兩次二氯甲烷提取液，倒入分液漏斗中，加5ml飽和氯化鈉溶液（有利分層），振搖，靜置分層。分出橙黃色有機(jī)相，使其流經(jīng)一個在頸部塞有疏松棉花且在棉花上鋪一層1cm厚的無水硫酸鈉的三角漏斗，以除去微量水分。將此溶液儲存于干燥的有塞子的錐形瓶中。層析之前，將此溶液在通風(fēng)櫥中用熱水浴蒸發(fā)至干。 2. 柱層析分離 取一支長15cm左右內(nèi)徑為1～1.2cm的層析柱，柱內(nèi)裝有用石油醚調(diào)制的氧化鋁[2]。將粗制的類胡蘿卜素溶解于4ml苯中，用滴管在氧化鋁表面附近沿柱壁緩緩加入柱中（留1～2滴供以后的薄層層析用），打開活塞，至有色物料在拄頂剛流干時即關(guān)閉活塞。用滴管取幾毫升石油醚，沿柱壁洗下色素，并通過放出溶劑至柱頂剛流干，從而使色素吸附在柱上。然后加大量的石油醚洗脫。黃色的B-胡蘿卜素在柱中移動較快，紅色的番茄紅素移動較慢。收集洗脫液至黃色的B-胡蘿卜素從柱上完全除去，然后用極性較大的氯仿作洗脫劑洗脫番茄紅素（注意更換接收瓶）。將收集到的兩個部分在通風(fēng)櫥內(nèi)用熱水浴蒸發(fā)至干。將樣品分別溶于盡可能少的二氯甲烷中，盡快進(jìn)行薄層層析。 3. 薄層層析檢驗 在用硅膠G鋪成的薄板[3]上距離底邊約1cm處，分別用毛細(xì)管點(diǎn)上三個樣品，中間點(diǎn)為未分離的混合物，兩邊分別點(diǎn)上分離得到的B-胡蘿卜素和番茄紅素。可以多次點(diǎn)樣，即點(diǎn)完一次，待溶劑揮發(fā)后再在原來的位置上點(diǎn)樣。但要注意，必須在同一位置上點(diǎn)，而且樣品斑點(diǎn)盡量小。點(diǎn)樣時毛細(xì)管只要輕輕接觸板面即可，切不可劃破硅膠層。樣品之間的距離為1～1.5cm。將此板放入裝有環(huán)已烷作展開劑的層析缸中，蓋上蓋子。切勿讓展開劑浸沒樣品斑點(diǎn)。待溶劑展開至10cm左右時，取出層析板。因斑點(diǎn)會氧化而迅速消失，故要用鉛筆立即圈出。計算不同樣品的R1值，比較不同樣品R1值大小的原因以及分離效果。 四、注釋 [1 ] 新鮮番茄漿的制備：將新鮮番茄洗凈，用搗碎機(jī)搗碎或用市售的番茄醬。 [2] 氧化鋁層析柱的裝填方法：將層析柱垂直固定于鐵架上，鋪上一層薄薄的石英砂，關(guān)閉活塞。稱取15g氧化鋁置于50ml錐形瓶中，加入15ml石油醚（順序不能反）邊加邊攪，且不斷旋搖直至成均勻漿液（稠厚但能流動），向柱內(nèi)加入溶劑（石油醚）至半滿，然后開啟活塞讓溶劑以每秒一滴的速度流入小錐瓶中，搖動漿液，不斷地逐漸傾入正在流出溶劑的柱子中，不斷用木棒或帶橡皮管的玻璃棒輕輕敲擊柱身，使頂部成水平面，將收集到的溶劑在柱內(nèi)反復(fù)循環(huán)幾次，以保證沉降完全和裝緊柱。整個過程不能讓柱流干。待溶劑剛好放至柱頂剛變干時即可上樣。 [3] 硅膠G薄層板的制備：將4g硅膠G置于一小燒杯中，加入8ml蒸餾水不斷攪拌至漿糊狀，傾倒在洗凈的玻板上（18 x 6cm），流平，或用涂布器鋪板，并輕輕敲打均勻，在室溫放置半小時涼干，然后移入烘箱，緩慢升溫至105～110℃恒溫活化半小時，取出放入干燥器中備用。
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通常葉綠素研磨儀主要應(yīng)用在對水質(zhì)樣品的葉綠素a提取。那該研磨設(shè)備的是怎樣對葉綠體的色素提取分離的呢，其操作原理如何，對色素的分離提取又在于哪些呢？
葉綠素A研磨儀可在幾分鐘內(nèi)完成對藻類細(xì)胞等樣品的研磨和粉碎，應(yīng)用丙酮溶液提取葉綠素a，可確保后續(xù)實(shí)驗對于水質(zhì)中葉綠素a濃度的準(zhǔn)確測量不受影響。另外，該研磨設(shè)備三維一體的振蕩研磨方式，可使樣品的研磨變得更均勻、更細(xì)、重復(fù)性更好，且樣品間無交叉污染，是真正的高通量研磨振蕩系統(tǒng)。
葉綠體色素分離的關(guān)鍵在于：葉片要新鮮、濃綠，研磨要快速、充分；在濾液收集后，要及時的應(yīng)用棉塞塞住試管口，防止濾液的揮發(fā)。葉綠體中色素的提取關(guān)鍵在于：濾液的細(xì)線不僅要細(xì)、直，而且要含有多種色素的存在，且過濾紙上的濾液細(xì)線不能接觸到層析液；避免接觸，濾紙上葉綠體中的色素將會在層析液中被溶解，則表示此次實(shí)驗失敗。
應(yīng)用丙酮提取葉綠體色素的濾液，在光源面前看到的是綠色。因為色素濾液對著光源，眼睛可感知到色素液的透射光。背對光源時看到的是紅色，也稱之為熒光。
應(yīng)用葉綠素A研磨儀可適用于這些樣品的應(yīng)用分析。組織勻漿液的快速分解，核酸、RNA、DNA和蛋白質(zhì)的提取純化；樣品PCR聚合酶鏈反應(yīng)的快速制備；酵母、細(xì)菌細(xì)胞的裂解分解；提取yao用活性成分；在LC/MS/MS 測試食品殘留農(nóng)藥或有毒物質(zhì)樣品處理，對農(nóng)藥/ 殺蟲劑等物的分析。
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