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  極品の飛豬 2017-01-12 00:00:00

  主要有差速離心和密度梯度離心 ：一般是先用差速離心初分離，再用密度梯度離心進(jìn)一步分離. 以下詳細(xì)： 細(xì)胞器的分離 細(xì)胞由細(xì)胞膜、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)組成，細(xì)胞質(zhì)中含有若干細(xì)胞器和細(xì)胞骨架等，這些也稱作亞細(xì)胞組分.對于細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能的研究，是細(xì)胞生物學(xué)的基本課題，其重要的研究手段之一是分離純的亞細(xì)胞組分，觀察它們的結(jié)構(gòu)或進(jìn)行生化分析.分離亞細(xì)胞組分的方法主要有差速離心和密度梯度離心. 一、差速離心（differentialcentrifugation） 在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器. 速度逐漸提高，樣品按大小先后沉淀 在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、Z后為核蛋白體. 由于各種細(xì)胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中，一般重復(fù)2～3次效果會好一些. 差速離心只用于分離密度和大小懸殊的細(xì)胞，更多用于分離細(xì)胞器.對于精細(xì)的分離，則是密度梯度離心效果更好. 密度梯度離心（densitygradientcentrifugation） 用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離. 這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種. A等速度沉降，B等密度沉降 二、密度梯度離心 速度沉降（velocitysedimentation）主要用于分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器.這種沉降方法所采用的介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的Z大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的Z小密度.生物顆粒（細(xì)胞或細(xì)胞器）在十分平緩的密度梯度介質(zhì)中按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離. 等密度沉降（isopycnicsedimentation）適用于分離密度不等的顆粒.細(xì)胞或細(xì)胞器在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)足夠大離心力和足夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的細(xì)胞或細(xì)胞器分離.介質(zhì)的Z高密度應(yīng)大于被分離組分的Z大密度，而且介質(zhì)的梯度要求較高的陡度，不能太平緩.這種方法適于分離細(xì)胞器，而不太適于分離和純化細(xì)胞. 葉綠體的分離 實驗方法 1.選取新鮮的嫩菠菜葉片，洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，撕成小碎塊，稱3g放于玻璃勻漿器中，加入10ml0.35MNaCl溶液，勻漿3～5min. 2.勻漿液用4層紗布過濾于50ml燒杯中. 3.將濾液平分到2個離心管中，天平配平，1000r/min下離心2min.棄去沉淀. 4.將上清液在3000r/min下離心5min.棄去上清，沉淀即為葉綠體. 5.將沉淀用0.35MNaCl溶液懸浮，取一滴葉綠體懸液滴于載片上，加蓋片觀察： ①在普通光鏡下觀察；②在熒光顯微鏡下觀察. 實驗結(jié)果 1.普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖型，在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色顆粒，即基粒. 2.熒光顯微鏡下，選用藍(lán)色激發(fā)濾光片，葉綠體發(fā)出火紅色熒光

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