全部評論(1條)
-
- ouyangting8829 2017-03-17 00:00:00
- 1、取培養(yǎng)至對數(shù)生長后期的含pBS質(zhì)粒的細(xì)菌培養(yǎng)液250ml，4℃下5000g離心15分鐘，棄上清，將離心管倒置使上清液全部流盡. 2、將細(xì)菌沉淀重新懸浮于50ml用冰預(yù)冷的STE中（此步可省略）. 3、同步驟1方法離心以收集細(xì)菌細(xì)胞. 4、將細(xì)菌沉淀物重新懸浮于5ml溶液I中，充分懸浮菌體細(xì)胞. 5、加入12ml新配制的溶液II，蓋緊瓶蓋，緩緩地顛倒離心管數(shù)次，以充分混勻內(nèi)容物，冰浴10分鐘. 6、加9ml用冰預(yù)冷的溶液III，搖動離心管數(shù)次以混勻內(nèi)容物，冰上放置15分鐘，此時應(yīng)形成白色絮狀沉淀. 7、4℃下5000g離心15分鐘. 8、取上清液，加入50ml RNA酶A(10mg/ml)，37℃水浴20分鐘. 9、加入等體積的飽和酚/氯仿，振蕩混勻，4℃下12000g離心10分鐘. 10、取上層水相，加入等體積氯仿，振蕩混勻，4℃下12000g離心10分鐘. 11、取上層水相，加入1/5體積的4mol/L NaCl和10% PEG(分子量6000)，冰上放置60分鐘. 12、4℃下12000g離心15分鐘，沉淀用數(shù)ml 70%冰冷乙醇洗滌，4℃下12000g離心5分鐘. 13、真空抽干沉淀，溶于500ml TE或水中. [注意] 1.提取過程中應(yīng)盡量保持低溫. 2.加入溶液II和溶液III后操作應(yīng)混和，切忌劇烈振蕩. 3.由于RNA酶A中常存在有DNA酶，利用RNA酶耐熱的特性，使用時應(yīng)先對該酶液進(jìn)行熱處理(80℃ 1小時)，使DNA酶失活.
-
贊(13)
回復(fù)(0)
熱門問答
- 氯仿提取dna包含線粒體dna嗎
2017-03-16 04:45:31
570
1
- 怎樣提取植物線粒體DNA
2017-04-22 08:34:49
782
2
- 魚類線粒體DNA怎樣提取
2017-04-27 21:08:03
340
1
- 提取總dna 包含mtdna嗎
2018-12-04 00:47:59
313
0
- 怎么從全dna中提取線粒體dna
2018-12-04 15:20:59
398
0
- 如何獲取線粒體DNA
2018-11-10 20:53:36
444
0
- 線粒體dna的提取取植物的哪個部位
2017-03-24 05:12:47
418
1
- DNA提取試劑盒與苯酚氯仿提取DNA法的異同
- 這兩個方法有什么區(qū)別？那個比較好？有什么要主意的嗎？ 提取試劑盒的詳細(xì)步驟是什么？
2016-01-06 18:38:29
676
1
- DNA提取試劑盒與苯酚氯仿提取DNA法有什么區(qū)別？
- DNA提取試劑盒與苯酚氯仿提取DNA法有什么區(qū)別？
2019-08-14 16:22:53
639
1
- 求助，線粒體DNA測序成本
2017-01-06 12:03:04
334
1
- 提取的質(zhì)粒dna是開環(huán)dna嗎
2018-11-12 18:14:03
479
0
- chelex 100提取dna后，純度太差，還可以用酚氯仿提嗎
2017-07-23 23:18:05
400
1
- 恐龍DNA能夠提取嗎
2017-07-29 16:13:00
430
1
- 頭發(fā)可以提取DNA嗎
2017-02-04 02:14:52
515
4
- 熟肉可以提取DNA嗎?
2018-12-02 01:11:01
327
0
- 指紋可以提取DNA嗎
2017-10-17 21:39:44
507
2
- 提取DNA能用組織勻漿機(jī)嗎?
提取DNA能用組織勻漿機(jī)嗎?
2021-04-02 17:23:33
322
0
- DNA怎么提?。?
- 方法
2018-12-05 02:52:26
474
0
- 怎樣提取DNA
- 怎樣提取DNA？ 我要提取植物的過程，盡量詳細(xì)。
2007-07-31 04:49:14
456
1
4月突出貢獻(xiàn)榜
推薦主頁
最新話題
滬公網(wǎng)安備 31011502008050號
參與評論
登錄后參與評論