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- wangpeiaili100 2017-05-31 00:00:00
- 全血基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）作用原來(lái)具體是這樣的：獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟，YZ物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，Z后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫. 試劑盒特點(diǎn)： 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟. 快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成. 多次柱漂洗確保高純度，典型的產(chǎn)量200μl全血可提取出3-6μg，純度達(dá)1.1.9，長(zhǎng)度可達(dá)30Kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng). 從十幾個(gè)配方中優(yōu)選出的紅細(xì)胞裂解液配方，裂解快速完全，客戶可根據(jù)需要選擇購(gòu)買. 說(shuō)明書中針對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程出現(xiàn)的疑難做出了詳細(xì)的解答，幫助你解決實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的問(wèn)題（如標(biāo)本中含有血凝塊、紅細(xì)胞裂解不完全、DNA產(chǎn)量低、DNA下游酶切不能切開或者酶切不完全、DNA長(zhǎng)度小于15kb、A260吸光值異常偏高、洗脫下來(lái)的DNA溶液還帶有輕微的顏色等）.
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- 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下：1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨；2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中... 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下： 1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨； 2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中； 3.充分混勻后，65℃水浴1h，期間不時(shí)輕緩震蕩； 4.12000rpm離心10min，取750μl上清液至另一離心管中； 5.加入等體積的Tris飽和酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），搖勻后12000rpm、離心10min； 6.取上層清液650μl，加入等體積氯仿·異戊醇（24:1），搖勻后12000rpm離心10min； 7.取550μl上清液至另一離心管中，加入等體積異丙醇； 10.-20℃放置1h或室溫下過(guò)夜； 11.12000rpm離心10min，倒棄上清液；70%冰冷乙醇洗滌沉淀2次； 12.倒棄上清液，風(fēng)干沉淀； 14.加100μlTE溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩? 可是不知道為什么Z后異丙醇沉淀出來(lái)的DNA居然是深綠色的，已經(jīng)接近黑色了。有的時(shí)候同樣的步驟做出來(lái)的又是白色或者黃色的，這到底是怎么回事啊！希望知道的人給我個(gè)提示！ 會(huì)不會(huì)是因?yàn)楹吐确?異戊醇反應(yīng)的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)？因?yàn)槲野l(fā)現(xiàn)我剩下的那些材料過(guò)一段時(shí)間后都變得很綠。 展開
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