人胰島素原(PI)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書

　　BS-0657人胰島素原(PI)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測人胰島素原(PI)水平。將純化的人胰島素原抗體包被于微孔板形成固相抗體，加入待測樣本后，樣本中的胰島素原與固相抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的胰島素原抗體形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)徹底洗滌后加入底物TMB顯色，TMB在HRP酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，酸性條件下變?yōu)辄S色。顏色深淺與樣本中胰島素原濃度呈正相關(guān)，通過酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度?。

　　二、試劑盒組成

　　包被抗體預(yù)包被微孔板

　　酶標(biāo)記抗體(濃縮液)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度)

　　通用稀釋液

　　20×洗滌液濃縮液

　　TMB底物溶液

　　終止液(酸性溶液)

　　封板膜

　　說明書

　　三、樣本要求

　　樣本類型

　　血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，收集上清。如有沉淀需再次離心?。

　　血漿?：使用EDTA或檸檬酸鈉抗凝，混合10-20分鐘后離心20分鐘。避免使用溶血或高血脂樣本?。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：離心20分鐘收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)成分時(shí)需用PBS稀釋細(xì)胞懸液至100萬/ml濃度，反復(fù)凍融釋放成分?。

　　尿液、胸腹水、腦脊液?：無菌管收集，離心20分鐘，取上清?。

　　樣本處理

　　樣本收集后若不及時(shí)檢測，建議分裝凍存于-20℃(保存12個(gè)月)或4℃(保存6個(gè)月)，避免反復(fù)凍融?。

　　樣本檢測前建議用通用稀釋液稀釋1倍以減少基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果計(jì)算時(shí)需乘以稀釋倍數(shù)。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. 試劑準(zhǔn)備

　　酶結(jié)合物工作液?：實(shí)驗(yàn)前15分鐘將100×濃縮酶結(jié)合物離心1分鐘，用通用稀釋液稀釋為1×工作濃度(如10μL濃縮液+990μL稀釋液)，當(dāng)日使用。

　　1×洗滌液?：取10mL 20×洗滌液濃縮液加入190mL蒸餾水，室溫輕搖至結(jié)晶完全溶解。

　　2. 操作流程

　　平衡?：從4℃取出板條，室溫平衡10分鐘，剩余板條密封放回4℃。

　　加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本(空白孔加100μL通用稀釋液)，37℃溫育1小時(shí)。

　　加生物素化抗體?：棄去液體，每孔加入100μL生物素化抗體工作液，37℃溫育1小時(shí)。

　　洗板?：每孔加入300μL 1×洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)洗滌3次。

　　加酶結(jié)合物?：每孔加入100μL酶結(jié)合物工作液，37℃溫育30分鐘。

　　再次洗板?：重復(fù)步驟4洗滌5次。

　　顯色?：每孔加入90μL TMB底物，37℃避光溫育15分鐘。

　　終止?：每孔加入50μL終止液，立即在450nm波長測定OD值。

　　五、結(jié)果計(jì)算

　　計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值，減去空白孔OD值得校正值。

　　以濃度為橫坐標(biāo)、校正OD值為縱坐標(biāo)，繪制四參數(shù)邏輯函數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得濃度，若樣本OD值高于曲線上限，需稀釋后重測并乘以稀釋倍數(shù)。

　　六、注意事項(xiàng)

　　試劑保存?：未使用試劑盒保存于4℃(6個(gè)月)或-20℃(12個(gè)月)，避免反復(fù)凍融?。

　　樣本處理?：避免使用溶血、高血脂或渾濁樣本，離心后需確保上清澄清?。

　　操作規(guī)范?：加樣時(shí)避免氣泡，洗滌需徹底;顯色后需及時(shí)終止反應(yīng)。

　　質(zhì)量控制?：建議設(shè)立復(fù)孔以提高準(zhǔn)確性，標(biāo)準(zhǔn)曲線需每次實(shí)驗(yàn)重新繪制。

　　應(yīng)用范圍?：本試劑盒僅供科研使用，以上僅供參考。

　　人胰島素原(PI)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。