GB 31658.17-2021 標(biāo)準(zhǔn)介紹

      動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物多殘留量的測定UPLC-MS/MS法

　　2022年《國家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》(簡稱國抽)與2021年相比，在畜禽肉及副產(chǎn)品項(xiàng)下多個(gè)產(chǎn)品種類中新增了檢測方法：《GB 31658.17-2021動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法》，該方法可同時(shí)檢測三大類獸藥殘留。

　　迪馬科技參考此標(biāo)準(zhǔn)，建立了SPE-UPLC-MS/MS法測定動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定的方法，利用Mcllvaine緩沖液(pH 5.0)和磷酸鹽緩沖液提取，ProElut PLS凈化，Leapsil C18色譜柱分離檢測；定量限與標(biāo)準(zhǔn)方法一致，為10.0μg/kg；回收率在60%-110%之間。方法實(shí)驗(yàn)過程基本參考標(biāo)準(zhǔn)，部分進(jìn)行優(yōu)化。對比國標(biāo)方法，本方案具有回收率高、方法穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

GB 31658.17-2021 標(biāo)準(zhǔn)介紹

動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物多殘留量的測定UPLC-MS/MS法

1、適用范圍

本方案適用于牛、羊、豬、和雞的肌肉、肝臟和腎臟組織中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留的檢測。方法定量限是10.0μg/kg。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1)單標(biāo)儲(chǔ)備液：分別稱取適量四環(huán)素、土霉素、金霉素、多西環(huán)素、噁喹酸、氟甲喹、諾氟沙星、依諾沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星，用甲醇配制成1.0mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液；

(2)16種磺胺混標(biāo)儲(chǔ)備液100.0μg/mL：包含乙?；前?、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲異噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺間二甲基嘧啶，每個(gè)目標(biāo)物濃度都是100μg/mL；

(3)13種喹諾酮混標(biāo)儲(chǔ)備液：分別稱取適量喹諾酮單標(biāo)儲(chǔ)備液用甲醇定容到10mL,得到50.0μg/mL的喹諾酮混標(biāo)儲(chǔ)備溶液；

(4)4種四環(huán)素類混標(biāo)儲(chǔ)備液：分別稱取適量四環(huán)素類單標(biāo)單標(biāo)儲(chǔ)備液用甲醇定容到10mL,得到100.0μg/mL的四環(huán)素類混標(biāo)儲(chǔ)備溶液；

(5)33種獸藥混標(biāo)儲(chǔ)備液1.0μg/mL：分別取(2)(3)(4)步驟的混標(biāo)儲(chǔ)備液適量，用乙腈配制成1.0μg/mL；

(6)33種獸藥混標(biāo)中間液0.1μg/mL：取適量(5)33種混標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成0.1μg/mL。

3、提取

(1)稱取樣品1.0g于50mL離心管中，加Mcllvaine-NaEDTA緩沖液*(pH 5) 8mL，渦旋5min，  6000rpm離心2min，收集上清液；

(2)殘?jiān)屑恿姿猁}緩沖液* 8mL，重復(fù)提取一次，合并提取液，混勻，備用。

*Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液：稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)10.9g、檸檬酸(C6H8O7·H2O)12.9g、乙二胺四乙酸二鈉鹽39.2g，加水900mL，用1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH至5±0.2，用水稀釋至1000mL。

*磷酸鹽緩沖液：取0.05mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190mL，用0.05mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至1000mL。

4、凈化

ProElut PLS 200mg/6mL(Cat.#: 68012)

(1)活化：依次加入5mL甲醇、5mL水，棄去流出液；

(2)上樣：加入待凈化液5mL，棄去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL水、5mL 5%甲醇水溶液淋洗，棄去流出液；

(4)洗脫：向柱中加入2.5mL甲醇，然后再加入2.5mL 2%氨水甲醇，收集流出液；

(5)重新溶解：將洗脫液在55℃下氮吹至0.5mL，加入0.5%甲酸水，并定容至1mL，過0.22μm Nylon 濾膜(Cat.#: 37177)，上機(jī)分析。

*注：同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5、分析條件

UPLC 條件

色譜柱：Leapsil C18 100x2.1mm, 2.7μm (Cat.#：86005)

流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：5μL

柱溫：40℃

流動(dòng)相：A:0.5%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸乙腈

梯度設(shè)置:

質(zhì)譜條件：

電離模式：ESI

掃描方式：正離子掃描

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測

電噴霧電壓：5500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi

離子源溫度：500℃

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

6、添加回收結(jié)果

7、相關(guān)產(chǎn)品信息

附錄一

19種磺胺類混標(biāo)(GB 31658.17-2021 | 2022國抽獸殘)

附錄二

13種喹諾酮混標(biāo)(GB 31658.17-2021 | 2022國抽獸殘)