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【超速“密”籍】冷凍電鏡制樣總翻車?破解蛋白聚集與碎片化的關鍵秘技

來源:貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司 更新時間:2026-04-01 13:45:30 閱讀量:40
導讀:【超速“密”籍】冷凍電鏡制樣總翻車?破解蛋白聚集與碎片化的關鍵秘技


電鏡(包括冷凍電鏡)制樣過程中,蛋白樣品的聚集、不均一、碎片化,都會影響成像的質量和分辨率。常用的樣品制備方法(比如色譜、透析、碳膜吸附),或多或少會出現(xiàn)這類問題。


怎么破?

GraFix密度梯度離心來幫忙

  • 大幅減少聚集與降解顆粒,樣本更均一

  • 提升圖像信噪比,高質量蛋白顆粒數(shù)量可提升數(shù)倍

  • 穩(wěn)定脆弱復合物,讓低豐度樣品也能上鏡解析

  • 兼容質譜、電鏡分子量測定、光散射、X射線衍射等多種技術,適用范圍廣


GraFix實驗示意圖


一邊用梯度離心把蛋白與其他雜質分開,一邊用固定劑把蛋白穩(wěn)定住。分餾后可以直接得到用來做負染電鏡或者無染色冷凍電鏡的樣品。


(c) 傳統(tǒng)法:只有10%的圖清晰,大部分模糊 (d) GraFix:86%的圖都非常清晰,對比度高GraFix信號是傳統(tǒng)法的2–5倍。(i)GraFix得到的70S核糖體冷凍電鏡結果:藍色為50S亞基,黃色為30S亞基,綠色為P位點tRNA,(j)與已知的X射線晶體結構完全吻合


密度梯度離心+化學溫和固定,讓蛋白穩(wěn)定、均勻、完整。同時,GraFix溫和固定不會產生假結構,結構真實可靠,還能幫助提高分辨率。


用GraFix制備的APC/C復合物,結構解析效果明顯提升,分辨率從25 ?提高到21 ?


GraFix同樣適用結構不穩(wěn)定、含量低的重要復合物。可讓蛋白結構更穩(wěn)定,可放心進行脫甘油處理。不會在吸附時解體,并可以長時間黏附在電鏡網上(幾小時),完整顆粒數(shù)量暴增10倍以上,完美解決低豐度樣品看不見顆粒的問題,是稀有復合物做冷凍電鏡的關鍵技術。


問題來了

如何配置GraFix

使用的線性梯度液和固定液?


使用OptiMATE全自動密度梯度分液系統(tǒng),即可輕松搞定!只需設置線性梯度液的體積、最低和最高濃度,儀器會通過精密的分液泵系統(tǒng)自動完成鋪設。即使是多管鋪設,也可保證鋪設液體的一致性和準確度。大大提高GraFix實驗的一致性和穩(wěn)定性。


同時,貝克曼庫爾特生命科學也提供從梯度液配置到超速離心,樣品回收分餾的全套密度梯度離心方案,確保每一次實驗的一致性與可重復性:



掌握“密”籍

開啟高分辨結構生物學新篇

從樣本制備的“老大難”到高清成像的“穩(wěn)準狠”,GraFix密度梯度離心技術正在幫助越來越多的研究者突破結構解析的瓶頸。無論是核糖體、APC/C這樣的大型復合物,還是含量稀少、穩(wěn)定性差的脆弱蛋白,都能在溫和固定與精準分離的雙重保障下,展現(xiàn)出最接近天然狀態(tài)的高清結構。


貝克曼庫爾特生命科學

助力您的每一次結構發(fā)現(xiàn)


OptiMATE全自動梯度制備分液系統(tǒng)

  • 動化、可重復的梯度制備

  • 線性梯度離心運行時間縮短75%

  • 僅需幾小時即可培訓新用戶

  • 適用于AAV、EV、LNP等多種樣品



Optima X系列超速離心機(現(xiàn)已國產)

  • 78年歷史超離技術積累,獨家設計技術領先

  • 配備先進軟件與多重安全保護

  • 多種轉子與離心管可選,滿足各類需求

  • 國產無需進口論證,縮短采購周期,供應鏈更穩(wěn)妥



OptiXTRACT樣品回收輔助工具

  • 導式針頭穿刺,安全提取條帶

  • 一次最多可同時抽取5個條帶

  • 實現(xiàn)精準、可重復的樣品回收



參考文獻

GraFix: sample preparation for singleparticle electron cryomicroscopy.

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貝克曼庫爾特公司對顆粒特性的研究始于上世紀的四十年代。從發(fā)明電子感應區(qū)技術(庫爾特原理)用于分析顆粒大小和數(shù)目開始至今半個多世紀以來,貝克曼庫爾特公司一直專注于顆粒分析的研究開發(fā)與應用。其顆粒特性分析儀器已經成為當今具競爭力和獨當一面的表征顆粒特性的產品!無論是對粒度的分析,還是顆粒的計數(shù);無論是在微米-亞微米范圍的測量,還是在納米尺度內的測量;既擁有應用庫爾特原理的產品,同時也擁有應用激光衍射散射原理以及動態(tài)光散射原理的產品,使貝克曼庫爾特公司成為粒度分析同業(yè)的翹楚!貝克曼庫爾特的產品已成為“高準確性”、“高分辨率”的代名詞,在用戶中享有盛譽。在粒度分析行業(yè)發(fā)展中一直發(fā)揮著深遠

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