怎么破?
GraFix密度梯度離心來幫忙
大幅減少聚集與降解顆粒,樣本更均一
提升圖像信噪比,高質量蛋白顆粒數(shù)量可提升數(shù)倍
穩(wěn)定脆弱復合物,讓低豐度樣品也能上鏡解析
兼容質譜、電鏡分子量測定、光散射、X射線衍射等多種技術,適用范圍廣
GraFix實驗示意圖
一邊用梯度離心把蛋白與其他雜質分開,一邊用固定劑把蛋白穩(wěn)定住。分餾后可以直接得到用來做負染電鏡或者無染色冷凍電鏡的樣品。
(c) 傳統(tǒng)法:只有10%的圖清晰,大部分模糊 (d) GraFix:86%的圖都非常清晰,對比度高GraFix信號是傳統(tǒng)法的2–5倍。(i)GraFix得到的70S核糖體冷凍電鏡結果:藍色為50S亞基,黃色為30S亞基,綠色為P位點tRNA,(j)與已知的X射線晶體結構完全吻合
密度梯度離心+化學溫和固定,讓蛋白穩(wěn)定、均勻、完整。同時,GraFix溫和固定不會產生假結構,結構真實可靠,還能幫助提高分辨率。
用GraFix制備的APC/C復合物,結構解析效果明顯提升,分辨率從25 ?提高到21 ?
GraFix同樣適用結構不穩(wěn)定、含量低的重要復合物。可讓蛋白結構更穩(wěn)定,可放心進行脫甘油處理。不會在吸附時解體,并可以長時間黏附在電鏡網上(幾小時),完整顆粒數(shù)量暴增10倍以上,完美解決低豐度樣品看不見顆粒的問題,是稀有復合物做冷凍電鏡的關鍵技術。
問題來了
如何配置GraFix
使用的線性梯度液和固定液?
使用OptiMATE全自動密度梯度分液系統(tǒng),即可輕松搞定!只需設置線性梯度液的體積、最低和最高濃度,儀器會通過精密的分液泵系統(tǒng)自動完成鋪設。即使是多管鋪設,也可保證鋪設液體的一致性和準確度。大大提高GraFix實驗的一致性和穩(wěn)定性。
同時,貝克曼庫爾特生命科學也提供從梯度液配置到超速離心,樣品回收分餾的全套密度梯度離心方案,確保每一次實驗的一致性與可重復性:
掌握“密”籍
開啟高分辨結構生物學新篇
從樣本制備的“老大難”到高清成像的“穩(wěn)準狠”,GraFix密度梯度離心技術正在幫助越來越多的研究者突破結構解析的瓶頸。無論是核糖體、APC/C這樣的大型復合物,還是含量稀少、穩(wěn)定性差的脆弱蛋白,都能在溫和固定與精準分離的雙重保障下,展現(xiàn)出最接近天然狀態(tài)的高清結構。
貝克曼庫爾特生命科學
助力您的每一次結構發(fā)現(xiàn)
參考文獻
GraFix: sample preparation for singleparticle electron cryomicroscopy.
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