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我們在最新的應(yīng)用報告中展示了一種基于HEK293細(xì)胞的TRPM8通道穩(wěn)健檢測體系，可在Sophion三大自動膜片鉗（APC）平臺——QPatch Compact、QPatch與Qube 384上穩(wěn)定運行。該檢測體系能夠可靠測量TRPM8的內(nèi)向與外向電流，并清晰體現(xiàn)激動劑與拮抗劑的溫度依賴性調(diào)控。

前言

TRPM8是一種溫度敏感型離子通道，屬于TRP（瞬時受體電位）通道家族。它是人體中主要的冷溫度和薄荷醇感受器，主要表達于背根神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)節(jié)的感覺神經(jīng)元中。該通道屬于非選擇性陽離子通道，主要傳導(dǎo)鈣離子（Ca2?）和鈉離子（Na?）。

TRPM8在疼痛調(diào)控中具有復(fù)雜作用，尤其與冷性痛覺過敏（即對冷刺激產(chǎn)生疼痛反應(yīng)）有關(guān)。研究表明，該通道的過度表達與前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌等多種腫瘤相關(guān)，可影響細(xì)胞的增殖、遷移和生存。此外，TRPM8還可能參與膀胱功能障礙和干眼癥的發(fā)病過程，通過調(diào)節(jié)淚液分泌發(fā)揮作用。

由于其在多種疾病中的復(fù)雜生理功能，TRPM8被認(rèn)為是潛在的重要治療靶點。

結(jié)果

圖1：外消旋薄荷醇（Racemic menthol, RM）激活TRPM8通道

該圖展示了在QPatch系統(tǒng)上，隨著外消旋薄荷醇（RM）濃度增加，TRPM8電流（特別是外向電流）顯著增強的過程。圖中包含不同溫度下（27°C與18°C）的濃度–反應(yīng)曲線比較。TRPM8對薄荷醇表現(xiàn)出典型的劑量依賴性激活特征。在低溫（18°C）下，薄荷醇的激活效力更高（即EC??值更低），說明溫度可顯著增強TRPM8對化學(xué)激動劑的敏感性。

表1：外消旋薄荷醇激活TRPM8的logEC??值

降低溫度（27°C→18°C）使外消旋薄荷醇的EC??值下降（效力增強），說明TRPM8激活的溫度依賴性增強。

圖2：(–)-薄荷醇激活的TRPM8內(nèi)向電流的溫度依賴性

圖中顯示在Qube 384系統(tǒng)上，使用100μM(–)-薄荷醇激活TRPM8通道后，在不同溫度下（27°Cvs18°C）產(chǎn)生的內(nèi)向電流軌跡。電流密度在較低溫度下明顯更高。TRPM8在(–)-薄荷醇作用下被顯著激活，產(chǎn)生強內(nèi)向電流。降低溫度（從27°C到18°C）顯著增強電流幅度，表明TRPM8的激活具有明顯的溫度依賴性。電流穩(wěn)定性良好，重復(fù)性高，驗證了Qube 384平臺可實現(xiàn)對溫敏離子通道的高通量測定。

圖3：Icilin激活TRPM8通道的溫度依賴性

圖示在Qube 384平臺上，通過應(yīng)用Icilin（超強TRPM8激動劑）誘導(dǎo)TRPM8電流激活。圖中展示了不同濃度的Icilin對外向電流的影響，以及在27°C與18°C下的濃度–反應(yīng)曲線比較。Icilin能顯著激活TRPM8通道外向電流，表現(xiàn)出濃度依賴性。當(dāng)溫度從27°C降低至18°C時，EC??值下降（從–6.72→–7.45），說明激活效力增強。溫度降低強化Icilin的作用，進一步證明TRPM8的活化對溫度高度敏感。Icilin是比薄荷醇更強的TRPM8激動劑，此實驗驗證其溫度增強效應(yīng)，為后續(xù)研究溫度與化學(xué)配體的協(xié)同門控機制提供證據(jù)。這也說明自動膜片鉗系統(tǒng)能精確捕捉細(xì)微溫度變化對通道活性的調(diào)制。

圖4：Capsazepine對TRPM8通道的阻斷作用

該圖展示了在QPatch系統(tǒng)上，Capsazepine（TRPM8拮抗劑）對已被100μM(–)-薄荷醇激活的外向電流的抑制作用。通過比較不同濃度下的電流響應(yīng)與濃度–反應(yīng)曲線，分析其抑制效應(yīng)及溫度影響。Capsazepine能有效、濃度依賴性地抑制TRPM8通道外向電流。在27°C與18°C下抑制效力差異不顯著，表明其作用幾乎不受溫度影響。與文獻報道的IC??值一致（見Table 2），驗證實驗結(jié)果的可靠性。

表2：Capsazepine阻斷TRPM8的logIC??值

Capsazepine的IC??在兩種溫度下差異不大，驗證了其阻斷作用不依賴溫度變化。所有系統(tǒng)間的數(shù)據(jù)變化范圍一致，表明Sophion自動膜片鉗平臺可實現(xiàn)高重復(fù)性與跨系統(tǒng)一致性。

總結(jié)

研究結(jié)果表明，利用HEK293細(xì)胞在Sophion自動膜片鉗平臺上可以穩(wěn)定、可重復(fù)地檢測TRPM8電流。該體系對藥物和溫度變化均有一致響應(yīng)，所得EC??與IC??值與文獻結(jié)果相符?？傮w而言，Sophion的中、高通量膜片鉗系統(tǒng)適用于TRPM8通道的藥理研究及藥物篩選。

若你的項目聚焦于溫度感受、冷性痛覺過敏或TRPM8相關(guān)疾病（如某些癌癥、眼科或膀胱疾?。?，該檢測體系可為你提供：

?已驗證的自動膜片鉗工作流程

?模擬生理冷敏反應(yīng)的溫度控制激活模式

?兼顧精細(xì)藥理分析與高通量篩選的多層次實驗通道

該TRPM8檢測方案不僅重現(xiàn)生理學(xué)溫度敏感特性，更為離子通道藥物開發(fā)提供了標(biāo)準(zhǔn)化、可轉(zhuǎn)移的實驗平臺。Sophion自動膜片鉗系統(tǒng)，讓TRPM8研究更高效、更精準(zhǔn)。