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背景介紹

TRPV1（Transient Receptor Potential Vanilloid 1）是一種受辣椒素（Capsaicin）激活的鈣通道，廣泛參與疼痛感知、炎癥反應(yīng)及溫度調(diào)節(jié)。其配體不僅包括辣椒素，還包括內(nèi)源性大麻素、樟腦、大蒜素和黑胡椒中的活性成分。

TRPV1盡管屬于結(jié)構(gòu)復(fù)雜的TRP家族，但其在體外表達(dá)和實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)相對(duì)穩(wěn)定，因此成為離子通道藥理研究的理想對(duì)象。

本研究采用Sophion Bioscience的QPatch全自動(dòng)膜片鉗平臺(tái)，對(duì)表達(dá)TRPV1的HEK293細(xì)胞進(jìn)行分析，分別比較了單孔（Single-hole）與多孔（Multi-hole）兩種測(cè)試模式下的藥理特征。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1展現(xiàn)了單孔（Single-hole）測(cè)定模式下的結(jié)果。

圖1A中顯示，隨著Capsaicin濃度遞增（如10、100、1000 nM），TRPV1通道電流逐步增強(qiáng)，顯示出良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

圖1B中顯示，加入1μM Capsaicin后再逐級(jí)加入Capsazepine，電流被有效抑制，表明Capsazepine為有效的TRPV1阻斷劑。

圖1C中結(jié)果顯示，電流隨時(shí)間變化圖進(jìn)一步確認(rèn)，Capsaicin誘導(dǎo)的電流峰值隨著Capsazepine濃度升高而逐步下降。

圖1D中使用Hill方程擬合得出Capsazepine的IC??為30.7±7.77nM（n=4），其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相一致。單孔模式電流穩(wěn)定，響應(yīng)曲線清晰，因此能夠用于定量分析TRPV1藥理學(xué)特性。

圖2展示了多孔（Multi-hole）測(cè)定模式下的結(jié)果。

圖2A中，Capsaicin激活電流遠(yuǎn)高于單孔模式，最大響應(yīng)電流達(dá)76.4±2.3nA（相比單孔模式僅為6.7±0.9nA），表明多孔模式可用于低表達(dá)系統(tǒng)或提高信噪比的實(shí)驗(yàn)。

同樣模式下Capsazepine對(duì)1μM Capsaicin誘導(dǎo)的電流具有良好抑制作用（圖2B）。

并且，圖2C中時(shí)間-電流圖展現(xiàn)出清晰的激活-抑制動(dòng)態(tài)過程，且重復(fù)性好。Capsazepine的IC??為43.3±12.6nM（n=8），與單孔模式數(shù)據(jù)在合理誤差范圍內(nèi)一致。因此，多孔模式能大幅增強(qiáng)信號(hào)強(qiáng)度，對(duì)于藥效評(píng)價(jià)尤其是高通量篩選更具優(yōu)勢(shì)。

研究結(jié)論

我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TRPV1在QPatch平臺(tái)上的表現(xiàn)穩(wěn)定，適用于激動(dòng)劑與拮抗劑的藥效分析。EC??和IC??等參數(shù)與既往文獻(xiàn)數(shù)據(jù)一致，驗(yàn)證平臺(tái)可靠性。并且具有可選多孔模式，能夠?qū)π盘?hào)增強(qiáng)明顯，非常適用于低表達(dá)模型及高通量藥篩。QPatch是一種高效、可靠的平臺(tái)，可顯著加速TRP通道類藥物的發(fā)現(xiàn)與驗(yàn)證過程，特別適用于疼痛、炎癥和神經(jīng)科學(xué)方向的靶點(diǎn)篩選。