
細(xì)胞破碎技術(shù)是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁,使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù),由于細(xì)菌、酵母、真菌、植物都有細(xì)胞壁,但成分不同,且同類細(xì)胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不同,因此其細(xì)胞壁的堅(jiān)固程度不同,總體呈現(xiàn)遞增態(tài)勢(shì)。動(dòng)物細(xì)胞雖沒(méi)有細(xì)胞壁,但具有細(xì)胞膜,也需要一定的細(xì)胞破碎方法來(lái)破膜,達(dá)到提取產(chǎn)物的目的。細(xì)胞破碎的方法主要分為化學(xué)法和機(jī)械法兩大類。具體如下:
化學(xué)法
滲透沖擊破碎法
? 方法:滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,運(yùn)用滲透壓的變化引起細(xì)胞快速膨脹而破裂。
反復(fù)凍融法
? 方法:將細(xì)胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反覆多次而達(dá)到破壁作用。
酶溶破碎發(fā)法
? 方法:利用各種水解酶,如溶菌酶、纖維素酶、脂酶等,將細(xì)胞壁分解,使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái)。
化學(xué)試劑法
? 方法:某些有機(jī)溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)含物有選擇地滲透出來(lái)。SDS(十二烷基磺酸鈉)是典型的陰離子表面活性劑
方法 | 技術(shù) | 原理 | 效果 | 成本 | 應(yīng)用 |
化學(xué)法 | 滲透沖擊 | 滲透壓破壞細(xì)胞 | 溫和 | 便宜 | 動(dòng)物組織均質(zhì)物或細(xì)胞懸液 |
酶消化法 | 細(xì)胞壁被消化 使細(xì)胞破碎 | 溫和 | 昂貴 | 細(xì)菌或酵母 | |
增溶法 | 表面活性劑溶解細(xì)胞壁 | 溫和 | 適中 | 動(dòng)物或植物組織均質(zhì)物 提取DNA | |
脂溶法 | 有機(jī)溶劑溶解細(xì)胞壁 并使之失穩(wěn) | 適中 | 便宜 | 動(dòng)物或植物組織均質(zhì)物 提取DNA | |
堿處理法 | 堿的皂化作用使細(xì)胞壁融解 | 劇烈 | 便宜 | 菌液質(zhì)粒 DNA提取 RNA提取 |
機(jī)械法
組織搗碎機(jī)
?方法:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至Z慢處,開動(dòng)開關(guān)后,逐步加速至所需速度。
? 特點(diǎn):一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
勻漿器
? 方法:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來(lái)回研磨,上下移動(dòng),即可將細(xì)胞研碎。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。
? 特點(diǎn):此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高,適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
? 存在的問(wèn)題:較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌,較小的革蘭氏陽(yáng)性菌以及有些亞細(xì)胞器,質(zhì)地堅(jiān)硬,易損傷勻漿閥者,不適合用該法處理。
研磨
? 原理:將液氮預(yù)凍的樣本放入研缽內(nèi)研磨
? 特點(diǎn):多用于堅(jiān)硬植物材料,研磨時(shí)常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
超聲波
? 原理:用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂,超聲對(duì)細(xì)胞的作用主要有熱效應(yīng),空化效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)。
? 特點(diǎn):處理少量樣本,操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性較好,節(jié)省時(shí)間;多用于微生物和組織細(xì)胞的破碎,如用大腸桿菌制備各種酶。
? 存在問(wèn)題:超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)變性失活;大容量裝置聲能傳遞,散熱均有困難,應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施;對(duì)超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用。
高壓勻漿
? 方法:利用超高壓能量使樣品通過(guò)狹縫瞬間釋放,在剪切效應(yīng)、空穴效應(yīng)、碰撞效應(yīng)的作用下,使細(xì)胞破碎。全過(guò)程在4~6℃低溫循環(huán)水浴中進(jìn)行,保持原有物質(zhì)活性。
? 特點(diǎn):可連續(xù)操作,適合于處理大量樣本,主要用于從微生物樣本中提取蛋白等胞內(nèi)產(chǎn)物。
振蕩珠擊破碎
? 方法:將等體積的小量組織樣品與高密度的磁珠或鋼珠等放入可密封的2ml螺旋蓋微量管中,設(shè)定振蕩速度、振蕩時(shí)間即可。
? 特點(diǎn):此方法是目前Z快且一次可處理Z多樣品的方法。一臺(tái)機(jī)器Z多可以在一天處理2400支樣品。適合小量、多樣的實(shí)驗(yàn)。
方法 | 技術(shù) | 原理 | 效果 | 成本 | 應(yīng)用 |
機(jī)械法 | 勻漿法 | 細(xì)胞被攪拌器劈碎 | 適中 | 適中 | 動(dòng)物組織 |
研磨法 | 細(xì)胞被研磨物磨碎 | 適中 | 便宜 | 植物組織 | |
超聲波法 | 用超聲波的空穴作用使細(xì)胞破碎 | 適中 | 昂貴 | 細(xì)胞懸液 | |
高壓勻漿法 | 須使細(xì)胞通過(guò)的小孔,使細(xì)胞受到剪切力而破碎 | 劇烈 | 適中 | 細(xì)菌提取蛋白 酵母 | |
珠磨破碎法 | 細(xì)胞被玻璃珠 或鐵珠搗碎 | 劇烈 | 便宜 | 組織均質(zhì)物 |
Bioprep-24生物樣品均質(zhì)儀

Bioprep-24生物樣品均質(zhì)器是一種高通量生物樣品均質(zhì)儀器,通過(guò)三維高速振動(dòng),同時(shí)處理多達(dá)24個(gè)裝有樣品。對(duì)于一般儀器難處理的土壤、頭發(fā)甚至骨骼、牙齒等特殊樣品,對(duì)頑固的細(xì)菌、真菌細(xì)胞壁,甚至孢子體的破壞性都非常有效,且整個(gè)均質(zhì)過(guò)程用時(shí)短,樣品升溫不明顯,配合相關(guān)試劑盒,可快速、高效、穩(wěn)定、批量的提取DNA/RNA蛋白質(zhì)等,并保留這些生物分子的完整性。
技術(shù)參數(shù)
振蕩速度:4.00m/s~7.00m/s(以0.05m/s遞增)
加速時(shí)間:≤4s
減速時(shí)間:≤4s
噪音等級(jí):<68db
顯示界面:OLED顯示,界面美觀漂亮,顯示信息豐富
ZDa樣本數(shù)量:24個(gè)樣品(2ml,1.5ml,0.5ml)/6個(gè)樣品(5ml)
運(yùn)行時(shí)間范圍:1-90秒(以1s為單位遞增)
暫停時(shí)間范圍:1-120秒(以1s為單位遞增)
程序儲(chǔ)存:可編程和存儲(chǔ)50個(gè)程序,Z多可設(shè)置10個(gè)循環(huán)
尺寸(W×D×H)mm:280×360×385mm
重量:25kg
電源:AC100-240V,50/60Hz,600w
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