熒光光譜是一種廣泛應(yīng)用的分析技術(shù)，但測試未知樣品熒光光譜即使對相對有經(jīng)驗(yàn)的用戶來講也往往一種挑戰(zhàn)。

下面是關(guān)于熒光光譜測量的步驟，是一篇新手友好型的操作小指南！面對未知樣品，沒有操作經(jīng)驗(yàn)的伙伴兒們也能從容測試哦！

當(dāng)測量未知樣品的熒光時(shí)，首先Z 好先測量一下樣品的吸光度。 熒光與吸收光成正比，因此可以確定Z大吸收波長。 愛丁堡穩(wěn)態(tài)瞬態(tài)熒光光譜儀FLS1000或FS5型號，均能夠?qū)崿F(xiàn)吸光度和熒光測試功能。在實(shí)際測試時(shí)，由于有些樣品的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜之間可能存在一些重疊。因此，通常可以選擇一個(gè)比這個(gè)Z大吸收波長位置更短的波長作為激發(fā)波長。 

下面這個(gè)樣品的實(shí)例是使用FS5 測試蒽環(huán)己烷溶液中的吸收光譜。Z大吸收值大約為0.1, 通常為避免內(nèi)濾效應(yīng)。我們將溶液濃度控制在0.1以下。在此基礎(chǔ)上，可以將蒽環(huán)己烷溶液樣品的激發(fā)波長設(shè)置為~355 nm或~375 nm。  

在FS5上測試的蒽環(huán)己烷溶液的吸收光譜圖

接下來， 激發(fā)和發(fā)射波長可以進(jìn)行調(diào)整，以Z大限度地提高感興趣的信號。同時(shí)可以調(diào)節(jié)激發(fā)和發(fā)射側(cè)單色器狹縫，從而讓更多的光通過。需要注意是，增加狹縫獲取更高信號的同時(shí)，會降低光譜分辨率(即光譜線的分辨率)。測試時(shí)增加信號強(qiáng)度cps，以獲得良好的信噪比，但應(yīng)低于探測器飽和極限: 標(biāo)準(zhǔn)PMT檢測器的飽和極限是150萬cps。當(dāng)單位時(shí)間內(nèi)過多的光子照射至探測器時(shí)，將使測試數(shù)據(jù)失真，測試譜圖扭曲；甚至有可能損壞檢測器。當(dāng)測試條件優(yōu)化好后，可以在光譜儀軟件中進(jìn)行測試參數(shù)的設(shè)置。愛丁堡光譜儀的測試窗口可以進(jìn)行波長范圍Scan range、步進(jìn)step、停留時(shí)間Dwell time和重復(fù)次數(shù)Number of scans等參數(shù)。如下面測試窗口所示。停留時(shí)間（在每個(gè)測試步進(jìn)點(diǎn)下的積分時(shí)間）和掃描次數(shù)對總采集時(shí)間有貢獻(xiàn)。顯然，更長的集成時(shí)間將提高數(shù)據(jù)的質(zhì)量。同時(shí)，背景扣除和校正文件的選項(xiàng)也可以在對話框中進(jìn)行勾選使用。

儀器軟件在獲取數(shù)據(jù)時(shí)繪制數(shù)據(jù)圖，生成如下圖所示的熒光光譜。

面對未知樣品，熒光測試是不是沒有想象中的那么難，你學(xué)會了嗎？