循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）精準(zhǔn)篩查對癌癥早期診斷、精準(zhǔn)治療、預(yù)后評估等意義重大，但每10 mL血液里可能只有幾個到幾十個CTCs，傳統(tǒng)分選方法準(zhǔn)確率低、成本高、效率慢，操作復(fù)雜，讓許多研究者望而卻步。

長光辰英的EnrichArray細(xì)胞富集分選芯片與PRECI SCS-F熒光單細(xì)胞分選儀聯(lián)用，可快速富集全血中的CTCs，還能進(jìn)行富集CTCs的原位抗體標(biāo)記，將CTCs逐一精準(zhǔn)分離。

應(yīng)用優(yōu)勢：四大創(chuàng)新，重新定義CTCs分選

 全血直接富集：無需預(yù)處理，避免細(xì)胞丟失，一步到位！

? 原位標(biāo)記：芯片上原位進(jìn)行抗體及探針等標(biāo)記，適用于各類CTCs。

? 非接觸式分選：激光與芯片介質(zhì)相互作用，細(xì)胞活性超過80%，數(shù)據(jù)更可靠！

? 精準(zhǔn)分離：單細(xì)胞得率>95%，提高CTCs及其他稀有細(xì)胞的獲取效率。

從富集到單細(xì)胞分析的全流程

數(shù)據(jù)展示

1、CTCs的高效富集

在模擬試驗(yàn)中，CTCs在PBS和全血中的捕獲效率分別能夠達(dá)到87.4%和88.3%，處理通量最高可達(dá)15.0mL/min。富集的 CTC細(xì)胞活性為81.3 ± 6.5%（圖1 b），富集后的CTC可進(jìn)行原位培養(yǎng)，在PRECI SCS-F熒光單細(xì)胞分選儀上觀察CTC熒光如圖1 c 所示。

圖1：EnrichArray細(xì)胞富集分選芯片細(xì)胞活力檢測

2、CTC的單細(xì)胞精準(zhǔn)分選

EnrichArray芯片富集后，微孔中包括CTCs及部分白細(xì)胞， 在芯片上原位使用特異性抗體對CTC進(jìn)行多重特異性染色及鑒定分選（圖2 a-c）。采用PRECI SCS-F單細(xì)胞分選儀能夠穩(wěn)定實(shí)現(xiàn)目標(biāo)CTCs的逐一精準(zhǔn)分離，單細(xì)胞得率>95%。

圖2 采用PRECI SCS-F進(jìn)行CTCs分選的流程及結(jié)果展示

圖a為明場和熒光下微孔中CTC細(xì)胞的鑒定和定位；圖b為PRECI SCS-F熒光單細(xì)胞分選儀的脈沖激光將細(xì)胞推出微孔的過程；圖c為細(xì)胞接收器中成功接收單個CTC的示意圖與顯微圖像

3、分選獲取CTCs的下游研究

對分選得到的CTCs分別進(jìn)行了單細(xì)胞培養(yǎng)與基于Smart-seq2的單細(xì)胞全程轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-Seq）（圖3a）。結(jié)果表明，回收的CTCs保持了高活性（圖3 b）和轉(zhuǎn)錄組完整性?；厥諉蝹€CTC的cDNA產(chǎn)量超過4.5ng（圖3c），scRNA-Seq的Q30得分均高于95.92%，表明了分選回收細(xì)胞的可靠性。

圖3PRECI SCS-F分選后的單細(xì)胞可實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-Seq）

圖a為回收單個CTC后進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)和scRNA-Seq的總體工作流程；圖b為分離培養(yǎng)第0天、第3天和第5天的腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)增殖結(jié)果；圖c為分選單個CTC逆轉(zhuǎn)錄的cDNA含量；圖d為PRECI SCS-F單細(xì)胞分選儀LAMFX, X = 1,2,3,4,5和顯微操作系統(tǒng)（MMX, X = 1,2,3,4,5）處理的單個CTC樣品間的scRNA-Seq相關(guān)性熱圖；圖e為圖d得到的差異基因聚類表達(dá)熱圖

結(jié)論

該研究中PRECI SCS 熒光單細(xì)胞分選儀結(jié)合EnrichArray細(xì)胞富集分選芯片，實(shí)現(xiàn)了全血樣品中CTCs的快速高效富集與單細(xì)胞無損分選，在細(xì)胞活性保持、分選通量及下游分析兼容性等方面均顯著優(yōu)于傳統(tǒng)技術(shù)，為CTCs及其他稀有細(xì)胞的深入研究提供了新策略，為腫瘤異質(zhì)性研究、藥物篩選及個體化治療提供了可靠平臺。

注：僅供科學(xué)研究參考，不可用于醫(yī)學(xué)診斷