人白介素2(IL-2)ELISA檢測試劑盒說明書

BS-0055 人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒

1. 產(chǎn)品概述

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)，用于體外定量檢測人血清、血漿、組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白介素2(IL-2)的濃度。IL-2是一種關(guān)鍵的細(xì)胞因子，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，能促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞的生長和分化，增強機體免疫功能。本產(chǎn)品僅供科研使用，嚴(yán)禁用于臨床診斷。

2. 檢測原理

雙抗體夾心法?：微孔板預(yù)包被抗人IL-2單克隆抗體，樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-2與之結(jié)合，形成抗體-抗原復(fù)合物。隨后加入生物素標(biāo)記的抗IL-2抗體，形成抗體-抗原-生物素標(biāo)記抗體復(fù)合物。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)，通過TMB底物顯色，酶標(biāo)儀測定吸光度(OD值)，IL-2濃度與OD值呈正相關(guān)。

靈敏度與范圍?：靈敏度通常為pg/mL級別(如7.81 pg/mL)，檢測范圍因產(chǎn)品而異(如31.25 pg/mL–2000 pg/mL或25 pg/mL–800 pg/mL)，具體以實際產(chǎn)品為準(zhǔn)。

3. 試劑盒組成

預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔/48孔，預(yù)包被抗IL-2抗體。

標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉，需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，配制梯度濃度。

標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液?：用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣本。

生物素化抗體?：濃縮液，需用稀釋液稀釋。

酶結(jié)合物(HRP標(biāo)記)?：濃縮液，需用稀釋液稀釋。

顯色底物(TMB)?：避光保存。

終止液?：終止顯色反應(yīng)。

濃縮洗滌液(20×)?：需稀釋成工作液。

封板膜?：用于孵育時封閉微孔板。

說明書?：詳細(xì)操作流程及注意事項。

注：試劑盒應(yīng)在2–8℃保存，有效期6個月。避免反復(fù)凍融，使用前恢復(fù)至室溫。

4. 樣本處理

血清/血漿?：采集后立即離心(如3000 rpm，10分鐘)，分裝凍存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。檢測前緩慢融化，離心去除沉淀。

細(xì)胞培養(yǎng)上清?：離心(如1000 rpm，5分鐘)去除細(xì)胞碎片，直接檢測或凍存。

組織勻漿?：用裂解液制備，離心取上清。

注意事項?：避免使用溶血、高血脂樣本;樣本稀釋需通過預(yù)實驗確定倍數(shù)，確保OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

5. 操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品配制?：用稀釋液復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品，梯度稀釋(如8個濃度點)。

加樣?：每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

洗滌?：用洗滌液洗板3–5次，拍干。

加生物素化抗體?：每孔加入100 μL工作液，37℃孵育60分鐘。

洗滌?：同步驟3。

加酶結(jié)合物?：每孔加入100 μL工作液，37℃避光孵育30分鐘。

洗滌?：同步驟3。

顯色?：每孔加入90 μL TMB底物，37℃避光孵育15–30分鐘。

終止?：每孔加入50 μL終止液，顏色由藍(lán)變黃。

檢測?：酶標(biāo)儀測定450 nm吸光度(OD值)，以630 nm為參考波長。

6. 結(jié)果計算

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合回歸方程(如四參數(shù)邏輯曲線)。

根據(jù)樣本OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算IL-2濃度。若樣本超出檢測范圍，需稀釋后重測。

7. 注意事項

試劑保存?：未使用試劑按說明書條件儲存，避免過期。

操作規(guī)范?：使用一次性吸頭和EP管，避免交叉污染;加樣時避免氣泡，孵育時用封板膜密封。

樣本處理?：避免NaN3干擾;細(xì)胞培養(yǎng)上清需離心徹底;組織樣本避免引入化學(xué)裂解物。

儀器要求?：酶標(biāo)儀需預(yù)熱，濾光片波長匹配(450±2 nm);洗板機浸泡時間建議10–30秒，或手動洗板時翻轉(zhuǎn)微孔板。

安全防護(hù)?：操作血液或體液樣本時，穿戴實驗服和手套，遵循生物安全條例。

8. 性能指標(biāo)

靈敏度?：≤7.81 pg/mL(具體以產(chǎn)品為準(zhǔn))。

重復(fù)性?：板內(nèi)變異系數(shù)(CV)<10%，板間CV<15%。

特異性?：與類似物無交叉反應(yīng)。

線性范圍?：樣本稀釋后與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R≥0.990。

9. 常見問題解答

樣本稀釋?：高濃度樣本需稀釋，建議通過預(yù)實驗確定倍數(shù)(如100倍稀釋：5 μL樣本+495 μL稀釋液)。

結(jié)果異常?：若OD值超出范圍，檢查樣本處理、試劑有效期及操作步驟;若顏色異常(如綠色)，終止液與底物未充分混勻。

試劑替換?：嚴(yán)禁使用其他批號或來源試劑替代。

10. 有效期與儲存

有效期?：6個月(2–8℃避光保存)。

儲存條件?：試劑盒組分按說明書分裝存放，避免反復(fù)凍融。

注：以上僅供參考，本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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