AMPure XP的核心是SPRI（solid phase reversible immobilization，固相可逆固定化）技術(shù)。自1990年代由麻省理工學(xué)院懷特黑德研究所開(kāi)發(fā)以來(lái)，這項(xiàng)技術(shù)就以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在核酸純化領(lǐng)域大放異彩，特別是在人類基因組計(jì)劃中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，幫助純化Sanger測(cè)序的PCR產(chǎn)物。SPRI技術(shù)能夠根據(jù)核酸的類型和大小，選擇性且可逆地將核酸與順磁珠結(jié)合，為核酸的高效純化提供可行性。

接下來(lái)我們將解剖開(kāi)AMPure XP，剖析是什么支撐小小磁珠30年持續(xù)發(fā)光發(fā)熱。

每個(gè)SPRI微球的尺寸達(dá)1μm±8%。微球內(nèi)核是一個(gè)具備浮力的聚苯乙烯芯，周圍環(huán)繞著磁鐵礦，使其具有順磁性，容易通過(guò)外加磁場(chǎng)進(jìn)行操縱。SPRI微珠表面被羧基分子包裹，為DNA結(jié)合提供用于相互作用的電荷基團(tuán)。

SPRI微珠作為SPRI試劑的重要組分，是核酸結(jié)合的堅(jiān)實(shí)固相支持基礎(chǔ)。試劑中其他兩項(xiàng)重要成分則助力SPRI微球發(fā)揮核酸結(jié)合的功能：

實(shí)驗(yàn)步驟分為四步：

AMPure XP試劑采用SPRI超順磁珠，依靠多因素平衡化學(xué)技術(shù)完成核酸結(jié)合、洗滌和洗脫步驟。結(jié)合緩沖液組分有助于核酸固定在磁珠表面富含官能團(tuán)的結(jié)合位點(diǎn)，洗滌步驟在溶解并去除污染物的同時(shí)，保持微妙平衡。洗脫步驟則會(huì)破壞這種平衡并重新溶解核酸，使其從磁珠分離。

是的，AMPure XP將結(jié)合單鏈和雙鏈核酸。注意：如果單鏈雙鏈同時(shí)存在的反應(yīng)體系，AMPure XP不會(huì)依據(jù)單鏈或雙鏈這一性質(zhì)，選擇性結(jié)合其中一種或拆分兩者。

AMPure XP試劑可結(jié)合DNA和RNA片段。RNAClean XP試劑是在無(wú)RNase條件下生產(chǎn)，且經(jīng)QC測(cè)試不含RNase。我們推薦使用RNAClean XP試劑盒處理RNA樣本。

沒(méi)有。AMPure XP將結(jié)合100 bp及以上的片段，并排除50 bp及以下的引物。50到100個(gè)堿基之間可能會(huì)存在少量回收。

磁珠的結(jié)合能力很強(qiáng)，1 μL AMPure XP試劑可結(jié)合至少7 μg核酸，但樣品會(huì)變得過(guò)于粘稠，影響后續(xù)樣品移液步驟。

10 kb以上的片段與磁珠結(jié)合非常緊密，如果樣品變干則難以洗脫。處理該類大片段時(shí)，應(yīng)盡可能完全地棄掉最后一次乙醇清洗液，立即加入洗脫緩沖液并充分混合。保持蓋子打開(kāi)狀態(tài)，乙醇在洗脫孵育期間將繼續(xù)從孔中蒸發(fā)。

不會(huì)。轉(zhuǎn)移到最終目標(biāo)板的磁珠在下游酶促反應(yīng)中表現(xiàn)為惰性。

回收率取決于片段大小、樣品體積、樣品濃度、洗脫體積等因素。在理想條件下，200 bp產(chǎn)物回收率高達(dá)90%，但在次優(yōu)條件下，回收率也可能低至60%。

AMPure XP試劑均基于產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注的儲(chǔ)存溫度進(jìn)行制造和測(cè)試，我們僅能確保該溫度下的試劑性能。

AMPure XP試劑盒用于PCR產(chǎn)物純化的試劑盒。我們推薦您使用專為片段大小篩選而開(kāi)發(fā)的SPRIselect試劑盒。有關(guān)SPRIselect片篩的更多信息，請(qǐng)?jiān)L問(wèn)：

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