類器官（organoids）是指利用干細(xì)胞、祖細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等在體外培養(yǎng)出的3D細(xì)胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物。2021年，類器官技術(shù)被列為“十四五”國家重點(diǎn)研發(fā)專項(xiàng)，作為疾病模型，相比于傳統(tǒng)2D疾病模型，類器官在闡明疾病的發(fā)展、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機(jī)理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，在多領(lǐng)域?qū)l(fā)揮重要，諸如細(xì)胞治療、藥物研發(fā)、基因工程、免疫研究、組織再生等領(lǐng)域。
下面將通過講述小鼠小腸類器官培養(yǎng)的全過程及相關(guān)注意事項(xiàng)為大家在培養(yǎng)過程中減少踩坑概率。
小鼠腸原代培養(yǎng)方法
樣本制備：小鼠斷頸處死，表面噴灑酒精殺菌。在無菌環(huán)境下截取出近胃端處3 - 15 cm腸組織，用鑷子小心去除腸道外部的腸系膜、脂肪后并放入4℃預(yù)冷的含1%雙抗DPBS溶液中。
樣本清洗：使用注射器沖洗腸道2 - 3次，用手術(shù)剪將腸管小心剪開，腸腔面朝上，用手術(shù)刀片輕輕刮去腸腔表面腸絨毛，待腸絨毛被刮凈后（呈現(xiàn)組織透明），將腸組織置于新的含DPBS的培養(yǎng)皿中清洗2 - 3次。
樣本初處理：將清洗后的小腸組織剪碎至2 mm大小塊狀體，順勢轉(zhuǎn)移至新的50 mL離心管中，用DPBS輕柔清洗3 - 5次，除去腸絨毛細(xì)胞和漂浮脂肪組織。
樣本消化：在小腸碎片組織加入10 - 15 mL含有3 - 5 mM EDTA 的預(yù)冷 DPBS 中消化，4℃孵育30 min左右，期間每10 min輕搖一次離心管。
消化完成后，棄去EDTA消化液上清，用新的DPBS緩沖液將組織輕柔漂洗2 - 3次以去除剩余的EDTA。
在小腸組織碎片中加入10 - 15 mL預(yù)冷的含0.1%BSA的DPBS，反復(fù)吹打、重懸組織碎片，使隱窩與基底層分離，然后取少許懸液鏡檢，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有隱窩樣結(jié)構(gòu)后，停止吹打，并對吹打后的組織懸液使用70 μm濾網(wǎng)過濾并收集穿過濾網(wǎng)的組織懸液。
重復(fù)步驟5 - 6兩次，1500 rpm、4℃離心3 min。
混合物形成：用Ceturegel基質(zhì)膠重懸隱窩組織沉淀，每10 μL基質(zhì)膠懸液包含200~600個(gè)隱窩，重懸后混合液置于冰上，盡快操作以避免基質(zhì)膠形成凝膠。
將混合懸液種植于24孔板底部正中央，每孔30 - 50 μL左右，避免懸液接觸孔板側(cè)壁。
將種植后的培養(yǎng)板至于37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育30min左右待Ceturegel基質(zhì)膠凝固。
待Ceturegel基質(zhì)膠完全凝固后，沿壁緩慢加入已配制好的Cebrary Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠腸類器官生長培養(yǎng)基，每孔800 μL直至完全浸沒混合物。
將24孔板置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每3天更換一次新鮮培養(yǎng)基并觀察類器官生長狀態(tài)，一般小鼠小腸類器官在5~7天內(nèi)形成。
翌圣類器官培養(yǎng)解決方案
還在為“配方難調(diào)、批次不穩(wěn)、成本飆升”而抓狂？翌圣生物一次性給出雙重解決方案，讓類器官培養(yǎng)從“玄學(xué)”變“工藝”。
Cebrary 成品培養(yǎng)基
開瓶即養(yǎng)：成分全部按“黃金比例”預(yù)混，無需再為濃度、批次差異反復(fù)調(diào)試；
性能突出：高效完成小腸隱窩分離并形成完整類器官；
穩(wěn)定省心：無血清，批間差異 CV＜10 %，實(shí)驗(yàn)成功率提升 30 %。
DIY 模塊化試劑盒
自由拼搭：細(xì)胞因子（EGF、R-spondin1、Noggin）、小分子（Y-27632、CHIR-99021）、基質(zhì)膠（Ceturegel）全部獨(dú)立包裝，可按項(xiàng)目需求自由加減，真正做到“用多少買多少”；
節(jié)約成本：成本直降 40 %；
小規(guī)格包裝：避免“買了整瓶用不完”的尷尬。
無論你是想極速啟動(dòng)還是靈活降本，翌圣都能讓類器官構(gòu)建從此“零門檻、高穩(wěn)定”。把時(shí)間和經(jīng)費(fèi)都花在真正的科學(xué)問題上！
翌圣生物
翌圣生物科技（上海）股份有限公司成立于2014年，是一家聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事核苷酸、蛋白、細(xì)胞和類器官四大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)。公司兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)和規(guī)?；a(chǎn)能力，核心產(chǎn)品數(shù)量達(dá)數(shù)千種，覆蓋分子克隆、qPCR、NGS、體外轉(zhuǎn)錄、抗體、蛋白純化及分析、細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、報(bào)告基因檢測和類器官等多種系列，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
全部評論(0條)
登錄或新用戶注冊
請用手機(jī)微信掃描下方二維碼
快速登錄或注冊新賬號(hào)
微信掃碼，手機(jī)電腦聯(lián)動(dòng)
相關(guān)產(chǎn)品推薦（★較多用戶關(guān)注☆）
N-Succinimidyl 3-maleimidopropionate（BMPS） 3-馬來酰亞胺丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯 |CAS 55750-62-4
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 3次
4E BP3 Mouse mAb 4E BP3小鼠單克隆抗體
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 2次
FITC AffiniPure Goat Anti-Human IgG(H+L) 綠色熒光
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 3次
Cas9 Nuclease
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 3次
(+)-Biotin N-hydroxysuccinimide ester（Biotin NHS） 生物素-N-羥基丁二酰亞胺活化脂
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 2次
N,N,N′,N′-Tetramethyl-p-phenylenediamine（TMPD） N,N,N',N'-四甲基對苯二胺 | CAS 100-22-1
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 0次
CDX2 Mouse mAb CDX2小鼠單克隆抗體
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 1次
Recombinant Human DHH Protein
報(bào)價(jià)：面議 已咨詢 1次
你可能還想看
①本文由儀器網(wǎng)入駐的作者或注冊的會(huì)員撰寫并發(fā)布，觀點(diǎn)僅代表作者本人，不代表儀器網(wǎng)立場。若內(nèi)容侵犯到您的合法權(quán)益，請及時(shí)告訴,我們立即通知作者，并馬上刪除。
②凡本網(wǎng)注明"來源：儀器網(wǎng)"的所有作品，版權(quán)均屬于儀器網(wǎng)，轉(zhuǎn)載時(shí)須經(jīng)本網(wǎng)同意，并請注明儀器網(wǎng)(m.sdczts.cn)。
③本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明來源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
④若本站內(nèi)容侵犯到您的合法權(quán)益，請及時(shí)告訴,我們馬上修改或刪除。郵箱：hezou_yiqi
熱點(diǎn)文章
學(xué)校配電站智能改造設(shè)計(jì)-實(shí)時(shí)響應(yīng)
近期話題
相關(guān)產(chǎn)品
在線留言
關(guān)注微信公眾號(hào)
微信小程序
滬公網(wǎng)安備 31011502008050號(hào)
參與評論
登錄后參與評論