乳腺癌類器官（Breast Cancer Organoids，BCOs）是源于乳腺癌組織或腫瘤細胞的三維體外培養(yǎng)模型，通過模擬體內(nèi)乳腺腫瘤微環(huán)境（細胞外基質(zhì)、特異性細胞因子及信號分子），讓腫瘤細胞在體外自我組裝形成具有三維結構、保留原發(fā)腫瘤核心生物學特征的“微型腫瘤”，是連接基礎研究與臨床轉(zhuǎn)化的核心工具，尤其適配乳腺癌的高度異質(zhì)性特征。
乳腺癌類器官培養(yǎng)步驟
乳腺癌樣本處理
冰盒提前放置15 mL離心管（83506ES）一支，提前加入3 mL Addf+++緩沖液（DMEM/F12（41420ES）+ Glutamax（60701ES）+ Hepes（715388ES）+ Penicillin/Streptomycin（60162ES）+ Primocin（60281ES），將新鮮腫瘤組織放于其中。
將離心管中腫瘤組織及Addf+++加入到6 cm培養(yǎng)皿（84002ES）中，用刀片將腫瘤組織切碎，留一部分放于凍存管（84105ES）中凍存?zhèn)溆谩?/span>
繼續(xù)用刀片將腫瘤組織切碎片至3 mm3大小，加入1 mL Addf+++吹打清洗。
用槍頭小心吸去培養(yǎng)皿中殘余的Addf+++。
將組織小心轉(zhuǎn)移至12孔板（84012ES）中，每孔加入1 mL提前稀釋的1.5 mg/mL膠原酶（40507ES），37度培養(yǎng)箱消化1-2個小時,期間每10分鐘用槍頭吹打一次，促進消化。
顯微鏡下觀察，確保組織完全消化。
將消化后的細胞全部轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，用Addf+++沖洗12孔板，確保所有消化細胞被完全轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中，加入適量紅細胞裂解液（40401ES）。
1500 rpm離心5分鐘，若見紅色沉淀，則室溫下加1 mL紅細胞裂解液，計時4分鐘，加入1 mL Addf+++吹打，1000 rpm離心5分鐘。
槍頭吸去上清，加入1 mL Addf+++輕輕吹打沉淀，1500 rpm離心5分鐘，棄上清。
基質(zhì)膠（Ceturegel）（40192ES）與培養(yǎng)基按25 μL：15 μL/孔混合。
將細胞與Ceturegel混合，均勻鋪在提前預熱的24孔板（84013ES）中，37度30分鐘凝固，24孔板每孔加入400 μL培養(yǎng)基，3-4天換液一次，2周傳代一次。
乳腺癌類器官傳代
37度培養(yǎng)箱取出24孔板，槍頭吸凈培養(yǎng)基，PBS（60158ES）洗兩次。
每孔加入500 mL PerfCell Tryzyme? Express（40135ES），37度消化20分鐘左右，用槍頭吹打促進消化。
顯微鏡下視野內(nèi)單細胞數(shù)量達到90%-95%時，每孔加入1 mL Addf+++終止消化，轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中，1000 rpm離心5分鐘，槍頭吸去上清，用預冷的Ceturegel重懸沉淀，1：2傳代，均勻鋪在24孔板中，37度30分鐘凝固，24孔板每孔加入400 mL培養(yǎng)基。
顯微鏡下觀察類器官形態(tài)，當連續(xù)成功傳代三次時認為類器官培養(yǎng)成功。
乳腺癌類器官凍存
凍存前一天將細胞換液。
標記凍存管（84105ES）。
取對數(shù)生長期的細胞，去除培養(yǎng)液。
預熱的PBS洗1-2次。
去除PBS，胰酶消化細胞，待細胞變圓、呈漂浮狀態(tài)時加完全培養(yǎng)液終止消化，吹打使其成為均勻的細胞懸液。
將細胞收集于15 mL離心管中，離心800 rpm，5 min。
去除上清，加含有保護劑的預冷凍存液，輕輕吹打使細胞懸浮。
將細胞懸液分裝于凍存管中，封口并標記。
將凍存管放置于凍存盒（84608ES）內(nèi)，置于-80℃；類器官能在-80℃穩(wěn)定保存一個月。
乳腺癌類器官復蘇
取出要復蘇的細胞，迅速將凍存管投入到已經(jīng)37℃預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，約1-2 min，使管中的冰凍細胞迅速融化到2/3狀態(tài)（不完全融化的目的是低溫減少DMSO對細胞的毒性）。
取出凍存管，用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
從預先準備的培養(yǎng)基本中吸取1 mL加入凍存管中，使剩余1/3完全融化，轉(zhuǎn)移細胞到剩余的培養(yǎng)基中。
用托盤天平平衡后，放入離心機中800 rpm離心5 min。
盡量吸除上清液后，加入1 mL培養(yǎng)液，吹打細胞使其成細胞懸液。
將細胞懸液全部移入已有培養(yǎng)液的24孔板中。
置于37度，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
乳腺癌類器官培養(yǎng)結果
用光學顯微鏡觀察乳腺癌類器官培養(yǎng)情況：
數(shù)據(jù)來源：Yeasen實驗室
結果顯示：乳腺癌類器官具有明顯的三維立體球形空間結構，邊界清晰。
Yeasen產(chǎn)品推薦
HiActi細胞因子
為支持乳腺癌類器官相關研究，翌圣生物依托多年研發(fā)生產(chǎn)經(jīng)驗與技術積累，開發(fā)了一系列“三高一低”的HiActi細胞因子，經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制及細胞功能的驗證，確保產(chǎn)品具有高活性、高純度、高穩(wěn)定性、低內(nèi)毒素水平，助您拿到理想的實驗結果。
其他產(chǎn)品
參考文獻：
1. He G-W, Lin L, DeMartino J, Zheng X, Staliarova N, Dayton T, et al. Optimized human intestinal organoid model reveals interleukin-22-dependency of paneth cell formation. Cell Stem Cell 2022; 29(9):1333-1345.e1336.
翌圣生物
翌圣生物科技（上海）股份有限公司成立于2014年，是一家聚焦生命科學產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事核苷酸、蛋白、細胞和類器官四大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術企業(yè)。公司兼?zhèn)浜诵募夹g自主研發(fā)和規(guī)?；a(chǎn)能力，核心產(chǎn)品數(shù)量達數(shù)千種，覆蓋分子克隆、qPCR、NGS、體外轉(zhuǎn)錄、抗體、蛋白純化及分析、細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、報告基因檢測和類器官等多種系列，廣泛應用于生命科學研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領域。
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